إعـــــــلان

تقليص
لا يوجد إعلان حتى الآن.

الكشف عن وجود الحامض النووي النقي (Pure DNA) أوالحامض النــــــووي المكبـــــــــر

تقليص
X
 
  • تصفية - فلترة
  • الوقت
  • عرض
إلغاء تحديد الكل
مشاركات جديدة

  • الكشف عن وجود الحامض النووي النقي (Pure DNA) أوالحامض النــــــووي المكبـــــــــر


    • الكشف عن وجود الحامض النووي النقي (Pure DNA) أوالحامض النــــــووي المكبـــــــــر (Amplicon DNA) بواسطة ترحيلة في هلامة الأجار بإستخدام طقم الفصل الكهربي (Agrose Gel Electrophoreses)
    يتم الكشف عن وجود الحامض النووي النقي وكذلك الحامض النووي المكبر بواسطة تمريره في هلامة الأجار المغمورة في جهاز الفصل الكهربي (Agrose Gel Electrophoreses).
    العينة المستخدمة :
    1. عينة الحمض النووي النقي(Pure DNA) المستخلص من الخلايا المناعية لجميع أفراد مجموعة العمل.
    2. عينة الحامض النووي المكبر(DNA Amplicon) باستخدام تقنية ((PCR.

    الأدوات اللازمة لإجراء الاختبار:
    1. طقم الفصل الكهربي (Agrose Gel Electrophoreses)
    ويتكون من:
    • طبق بلاستيكي للأجار.
    • أمشاط تثبت على الطبق لزوم تشكيل نقر على هلامة الأجار.
    • الحاوية المتنقلة الداخلية لجهازالفصل وهي متصلة بالدائرة الكهربائية.
    2. أنابيب اختبار سعة 2مل بعدد العينات.
    3. محلول TAE)) (Tries Acetate EDTA)
    4. جهاز الأشعة الفوق بنفسجية.
    5. دورق زجاجي.
    6. لهب بنزين.
    7. شريط لاصق.
    8. مقدار من صبغة بروميد الفينيل الزرقاء (Bromo phiynile blue) (مذوبه في كمية متساويه من الجلسرين والماء).
    التحــضيــر :
    1) يتم اذابة العينات من الفريزر(Pure DNA) أو (DNA Amplicon) وتترك في درجة حرارة الغرفة من (20°م-25°م).
    2) يضاف مقدار من مسحوق الأجار الى محلول (TAE Buffer) المذاب في الماء المقطر بنسبة تركيز 2% ويذوب الخليط جيدا" بداخل دورق زجاجي , يوضع الدورق على اللهب مع التحريك المستمر حتى يتم ذوبان الأجار تماما" وحتى يتجانس المخلوط.
    3) يترك محلول الأجار لبعض الوقت حتى تنخفض درجة حرارته قليلا".
    4) يضاف إلى الدورق مقدار من صبغة الاثيديوم بروميد(Ethidum Bromide)
    مع توخي الحرص عند استخدامها فهي مادة مشعة مسرطنة وسامة , يقلب الدورق حتى تتجانس الصبغة مع الأجار.
    5) يجهز طبق الأجار بغلق حوافه الأربعة بالشريط اللاصق العريض حتى يصبح الشريط كالجدار العازل المانع لتسرب الأجار من الطبق قبل أن يجمد.
    6) يصب محلول الأجار المحضر في الطبق المجهز ثم تثبت الأمشاط على مسافات متساوية في أماكنها المخصصة لها و يترك الطبق لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة من (20°م-25°م) حتى تجمد هلامة الأجار.
    7) ترقم أنابيب سعة 2 مل بأرقام العينات المختبرة ثم يوضع
    من كل عينة10µ في الأنبوبة المخصصة برقمها.
    8) يوضع على كل أنبوبة5µ من صبغة بروميد الفينيل الزرقاء (Bromo phiynile blue) الى نهاية العينات.
    9) تزال الأمشاط والشريط اللاصق من الطبق .
    10) يوضع من كل عينة (Pure DNA) ,(Amplicon DNA) مقدار 15µ في النقرة المخصصة له في هلامة الأجار.
    11) يوضع الطبق في حاوية جهاز الفصل الكهربي ويغمر بمحلول الغمر TAE)).
    12) تفتح دائرة الفصل الكهربائية لكي يمر التيار خلال هلامة الأجار فيعمل على ترحيل الحامض النووي النقي أو المكبر من القطب الموجب إلى القطب السالب .
    13) يترك الطبق حوالي 60دقيقة وبعد مرور الوقت تظهر خطوط بنفسجية اللون تشير إلى وجود الحامض النووي (Pure DNA), (Amplicon DNA) ويمكن الكشف عن هذه الخطوط بواسطة الأشعة الفوق بنفسجية (UV.System) .

  • #2
    مشكوره اميره الورد الوره هو موضوعك الرائع

    تعليق

    يعمل...
    X