إعـــــــلان

تقليص
لا يوجد إعلان حتى الآن.

(RAPD Technique)

تقليص
X
 
  • تصفية - فلترة
  • الوقت
  • عرض
إلغاء تحديد الكل
مشاركات جديدة

  • (RAPD Technique)

    (RAPD Technique)
    التعددية الشكلية لقِطَع الـ DNA المُكاثرة عشوائياً
    (Random Amplified Polymorphic DNA)

    أولا: مقدمة تمهيدية...وتعريف بالتقنية .

    هي تقنية حديثة نسبياً بدأ العمل بها مطلع التسعينات من القرن المنصرم..تسمح بمسح كامل الهيئة الكرموزومية للكائن عشوائياً للكشف عن أي تغيرات وراثية في ذخيرته الوراثية .

    يستعمل في هذه التقنية بادئ صنعي (وليس طبيعي) وحيد (وليس مزدوج) مؤلف من عشرة أسس آزوتية (ذات تتابعات عشوائية لكن غالباً ما تحتوي على GC بنسبة 50 % على الأقل)...لا يقتصر استخدام هذه التقنية على بادئ واحد معين إنما يُستعمل فيها عدة مئات من البوادئ يرمز لكل منها بأحد الأحرف الإنكليزية الستة والعشرين وعن يمينه رقم ، ومجال هذا الرقم هو من (20←01) فعلى سبيل المثال نقول : البادئ (P02) ، أو البادئ (W16) أو البادئ (Z01) أو البادئ (A10)...الخ .


    وبالتالي يكون عدد البوادئ المستخدمة في هذه التقنية هو 20*26 = 520 Primers) وكلها معروفة التسلسل النكليوتيدي .

    تبنت شركة (Operon) الأمريكية حق بيع هذه البرايمرات..لذا أصبحت هذه البرايمرات تعرف عالمياً باسم
    (Operon Primers) .

    ثانياً :تطبيق اختبار الـ (RAPD) وكشف النتائج .

    بالعودة إلى تفاعل الـ (PCR) السابق ولدى تطبيقه على تقنية الـ (RAPD) يتم إضافة أحد البوادئ الـ (520) لوسط التفاعل (بادئ واحد فقط) .

    في البداية ترفع درجة الحرارة إلى الـ (96) درجة مئوية فتبدأ عملية فصل سلسلتي الـ (DNA) عن بعضهما وبعد زمنٍ محدد تخفّض درجة الحرارة وما إن تصل درجة حرارة الوسط إلى الدرجة التي تلائم التصاق البادئ يبدأ هذا الأخير بعملية الالتصاق (Primer annealing) عشوائياً في أي مكان من جينوم الكائن بمجرد تطابق تسلسله النكليوتيدي مع تسلسل نكليوتيدي موجود على سلسلة الـ (DNA)...أي أن عملية التصاق ستتم بشكل عشوائي وليس بشكل انتقائي.ثم تأتي بعد ذلك عملية الاستطالة (Extension) لمدة محددة وتنتهي الدورة الأولى لتبدأ الدورة الثانية .

    في النهاية يتم تحميل العينة الناتجة في حارة من حارات هلام الأغاروز فتنفصل العينة إلى بضع قطع (Bands) مرتبة ابتداءً بالكبيرة وانتهاءً بالصغيرة ولتكن نتائج هذه العينة مثلاً النتائج الموجودة في الحارة رقم (1)...للشكل المجاور .
    الآن...نعيد التجربة نفسها بنفس البادئ ونفس الزمن (نستخدم نفس البرنامج في جهاز PCR)

    لكن مع نبات آخر من نفس النوع...فإذا لاحظنا أيّ تغير في تواجد القطع الناتجة عن عينة النبات الأول مع القطع الناتجة عن عينة النبات الثاني فهذا يدل قطعاً على وجود اختلافات وراثية مابين العينتين وبالتالي يمكننا التنبؤ عن حالة "السيادة والتنحي" في النباتين .

    إلا أننا لا نستطيع الحكم بدقة...أيهما السائد وأيهما المتنحي لأن تواجد قطعة ما قد يكون ناتجاً عن عينة نبات نمطه الوراثي بالنسبة لصفة ما هو (aa) في حين لا تتواجد هذه القطعة في عينة النبات الآخر ذو النمط الوراثي (AA) بالنسبة لنفس الصفة فهل نقول أن النبات (aa) راجح على النبات (AA) بالنسبة للصفة المدروسة من البديهي لا......إنما وجود هذه القطعة في حارة النبات الأول وغيابها في حارة النبات الآخر يعطينا فكرة مفيدة عن وجود حالة "سيادة وتنحي" في النباتين بالنسبة لهذه الصفة وبالتالي وجود تباين شكلي بين العينتين المختلفتين (Polymorphism) بالنسبة للصفة المدروسة .

    أما في حالة تواجد قطعتين من عينتين مختلفتين بنفس المستوى فهذا يعني وجود تماثل شكلي بين العينتين (Monomorphism) أي تماثل وراثي بين العينتين بالنسبة للصفة المدروسة...إذاً هذه التقنية تميز بين النمطين الوراثيين (AA & aa) وتعجز عن التميز بين النمطين (AA & Aa) .

    مما سبق نستنتج أن كثافة القطع على هلام الأغاروز غير مهم إنما تبرز الأهمية في هذه التقنية من وجود أو غياب هذه القطعة .


    ثالثاً : محاسن ومساوئ تقنية الـ (RAPD) .


    • محاسنها ومميزاتها :

    1- تطبق على مختلف الأنواع (إنسان ، حيوان ، نبات ، بكتيريا....الخ) .
    2- تطبق في أيّ مختبر في العالم .
    3- هي تقنية سريعة وبسيطة لا تحتاج لخبرة.
    4- تكاليفها زهيدة .

    • مساوِئُها وسلبياتها :

    1- مما لا شك فيه أنّ أبرز ما يميز هذه التقنية أنها تقنية عشوائية .
    2- تكشف عن وجود السيادة أو عدم وجودها فقط أي أنها تميز بين النمطين الوراثيين
    (AA & aa) وتعجز عن التميز بين النمطين (AA & Aa) .
    3- نتائجها غير قابلة للتكرار...أي لا يمكن مقارنة نتائج اختبار الـ (RAPD) لعينة ما
    وبنفس الشروط في مختبرين اثنين وطبعاً هذا ناتج عن كون هذه التقنية عشوائية .
    الملفات المرفقة
    التعديل الأخير تم بواسطة adelaksh; الساعة 06-09-2010, 11:08 PM.

  • #2
    موضوع شيق سلمت يداك
    تكلمت عن شكل مجاور هل يمكن لك رفع الصورةلتكون المعلومات اوضح
    وشكرا على المعلومات القيمة
    كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

    تعليق


    • #3
      شكرا على الموضوع
      التعديل الأخير تم بواسطة *Red Rose *; الساعة 04-12-2010, 12:08 PM.

      تعليق


      • #4
        يعطيك العافيه
        إذا أردت أن تعيش سعيداً .. إنزع الحقد من قلبك

        تعليق


        • #5
          يعطيك العافية

          تعليق


          • #6
            يسلمو


            تعليق

            يعمل...
            X