استفسار عن عمل المقاطع النسيجية

[lolo7]

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته
بسم الله الرحمن الرحيم وبه نستعين

أخوتي الأعزاء أعضاء المنتدى العامر و الكريم ساعدوني جزاكم الله خيرا أنا أدرس الماجستير و عندي مطلوب في رسالتي جزء هستولوجي خاص ببعمل انسجة هستولوجية لاعضاء حيوانات التجارب عندي كدليل عندي على حدوث الاصابة او التلوث وانا يوجد عندي جهازMicrotom وكنت اود أن يساعدني أحد الاخوة منكم في خطوات استخدام الجهاز وكيفية العمل عليه و خطوات و ادوات الازمة لتجهيز الشريحة المرادة لعضو الكبد والكلى لدى الحيوان المعامل لدي

[العبسي]

بسم الله الرحمن الرحيم
بالنسبه لتهيئه الشريحه المراده تبدأ بأخذ قطعه صغيره من العضو المراد فحصه تبدا بالخطوات الروتينيه لاي نسيج وبعد ان تصبه في قوالب الشمع تتركه يتصلب ثم تبدا بتقطيعه بالمايكروتوم بوضع قالب الشمع الذي يحوي النسيج في المكان المخصص له في الجهاز بوضعيه صحيحه ثم تختار السكين المناسب وتثبتها في مكانها المخصص في الجهاز واحذر منها لانها حاده جدا وبعدها تبدأ بتقريب القالب المثبت ببطء حتى يلامس السكين وتختار قياس سمك القطع في البدايه اختار سمك كبير لاباس وشغل الجهاز اذا كان يدويا او اوتوماتيك الى ان يصل مستوى القطع للنسيج قلل السمك الذي تريده تقريبا 15 مايكروميتر وشغل المايكروميتر حتى تحصل على شريط من الشمع يحوي بذداخله النسيج . يعني من وسط قطعه النسيج التي اخذتها , خذ قطعه من الشريط وابدأ بالخطوات االلاحقه

[lolo7]

بسم الله الرحمن الرحيم وبه نستعين

الأخ الفاضل :- اشكركم شكرا جزيلا على الرد الكريم وارجو ان لا اثقل عليكم في طلب رد لسؤال آخر منكم جزاكم الله خيرا وجعل صنيعكم هذا في ميزان حسناتكم انشاء الله وسؤال الثاني هو كيفية تهيئة الشريحة بعد التقطيع بجهاز الميكروتوم من حيث وضع الصبغات وما هي الخطوات والحسابات المطلوبة قبل الصبغ واسالكم ان يكون ردكم بصور توضيحية اذا امكن

[العبسي]

بسم الله الرحمن الرحيم
تهيئه الشريحه بعد التقطيع يكون كالاتي:
بعد انهاء عمليه التقطيع والحصول على شريط من المقاطع ناخذ احد هذه المقاطع ونضعها بماء درجه حرارته اقل ب10 درجات عن درجه ذوبان الشمع في الحمام المائي
ومن ثم نأخذ سلايد نظيف وجديد وندهنه بماده تساعد على التصاق الشريحه فوق السلايدMayer,s glycerol - albumin
ونسحب السلايد تحت المقطع الطافي في الحمام المائي بحيث يلتصق كليا ونتجنب الفقاعات الهوائيه.
ثم نبدا عمليه الصبغ بعد ان نتركه يجف واول خطوه للصبغ هي التخلص من الشمع المتبقي في المقطع بواسطه وضعه بالxylene لمده 2 الى 3 دقائق ونحوله الكحول 100% لمده 30 ثانيه لمرتين ومن ثم 90% ,لمده 30 ثانيه و70% كحول لمده 30 ثانيه ومن ثم الغسل بالماء المقطرومن ثم عمليه الصبغ حسب نوع الصبغه المستعمله حيث تختلف الصبغات باختلاف نوع النسيج
وبعد الصبغ نمرر السلايد بالعكس من 70% كحول صعوداالى ان نصل الى تركيز 100% للتخلص من الماء وننقيه بال xylene
لمرتين ومن ثم نتركه يجف..ليصبح جاهزا للفحص بعد ان نغطيه باكانادا بلسم والكوفر سلايد ليصبح سلايد دائمي
واعتذر لان ما عندي صور حول الموضوع //// لان بصراحه معلوماتي بالحاسبه واضافه الصور والملفات بسيطه.............. مع تقديري

و

[lolo7]

بسم الله الرحمن الرحيم وبه نستعين
اخونا الفاضل اشكركم شكرا جزيلا على المعلومات المفيدة والهامة ولكن لو كان في امكانكم وضع الصور التوضيحية التي تمتلكوها على اي موقع للرفع ومن ثم تعطوننا الرابط الخاص بالصور على موقع الرفع يكون لكم جزيل الشكر والثناء وجزاكم الله خيرا وجعل فعلكم الخير هذا في ميزان حسناتكم .

[العبسي]

بسم الله الرحمن الرحيم
ما اعرف كيف انزلهن /// وما اعرف سوالف الرابط والرفع بس راح اسأل //// وتدلل

[مختبري مملكتي]

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته

استخدام الجهاز ووضع العينة المقطوعة على الشريحة الزجاجبة:
1- بعد تثبيت العينة في مكعب الشمع على الجهاز...
2- يتم ضبط الجهاز على 6 مايكرون للأغراض الطبية.
3- يتم القطع بهدوء بواسطة إدارة العجلة وبحرص شديد لأن النصل حاد جدا...
4- عند البدء بالقطع يتم امساك الشرائح المقطعة بواسطة ملقط وبادارة العجلة تسحب القطع متصلة مع بعضها كأنها شريط لفيلم الكاميرا...
5- بعد قطع عدد كافي من الشرائح (6-10) متصلين يتم وضعهم في حمام مائي بدرجة عالية ولكن لا تسمح للشمع بالذوبان فيه ( أقل 10 درجات من حرارة ذوبان الشمع المستخدم تقريبا).
6- يتم فصل القطع المتصلة باستخدام ملقط (تحتاج شوية تدريب عملي... حسب الطريقة اللي تعلمتها بالمختبر أن أغلق ملقط على الآخر وأحط طرفه بين الشريحتين وافتحه وهو بين الشريحتين ورح يفصلهم!!!)...
7- الخطوة التالية أننا نحضر شريحة مجهرية وننزلها تحت سطح الماء بحانب العينة بشكل عموووودي على سطح الماء ونقرب الشريحة من العينة الطافية بهدوء ونبدأ نميل الشريحة بزاوية لما نقترب من العينة بشكل كبير ونرفع العينة على الشريحة بهدوء (ملاحظة: لازم يكون معظم الشريحة في الماء لما تلتصق طرف العينة فيها لأن الشريحة مقسمة إلى 3 طرفين فاضيين ومنتصف اللي فيه العينة وبالتالي لازم تقديريا ثلثين الشريحة تحت الماء لما نلصق الشريحة بالعينة الطافية.)

التحضير لعملية الصبغ:
1- توضع الشريحة في xylene لمدة دقيقتين ثم في xylene مرة ثانية ومرة ثالثة أيضا لمدة دقيقتين. نقوم بتغيير ال xylene لأن مع الاستخدام المتكرر رح يخف تركيزة لأن الشمع بيذوب فيه ( واحنا بنحضر في اليوم الواحد عينات بالدرازن!!! بس إذا عينة وحدة ما أعتقد لازم يتغير لها المحلول)
2- تنقل الشريحة إلى الكحول المركز 100% وتوضع فيه لمدة دقيقتين ومرة أخرى لمد دقيقتين ثم في كحول 90% لمدة دقيقتين أيضا.
3- تنقل الشريحة إلى الماء المقطر لمدة دقيقتين.

الصبغ:
1- يستخدم ال hematoxylin لصبغ الأنسجة (حسب معلوماتي أن الكبد والكلى من ضمنها).. يتم وضع الشريحة في تلك الصبغة لمدة 7 دقائق.
2- ثم يستخدم الماء الجاري لمدة 5 دقائق. (توضع الشريحة في علبة زجاجية خاصة بغسل الشرائح بالماء الجاري ويتم غسلها)
3- توضع الشريحة في الكحول 70% وتسحب فورا (تغطيس واحد فقط!!!)
4- توضع الشريحة في صبغة ال eosin لمدة دقيقتين.

ازالة الماء من الشريحة لمنع تلفها مع الوقت:
1- توضع في كحول 70% وتسحب 6 مرات ( 6 dips)
2- توضع في كحول 90% وتسحب 6 مرات ( 6 dips)
3- توضع في كحول 100% وتسحب 6 مرات ( 6 dips)
4- توضع في xylene وتسحب 6 مرات ( 6 dips)
5- توضع في xylene وتسحب 6 مرات ( 6 dips)

يتم استخدام DPX ثم تغطى الشريحة بغطاء الشريحة.

سأقوم برفع 4 صور و إن شاء الله تساعدكم

[مختبري مملكتي]

هذه صور أخرى بس لكبر الحجم وضعتها في ملف مضغوط

موفقين إن شاء الله

[مختبري مملكتي]

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته

وجدت بعض المواقع المفيدة وتحتوي على صور توضيحية...

http://bio-path.com/slides.htm

http://www-bioc.rice.edu/bios576/immuno/immuno.html

http://www.dnr.state.md.us/fisheries/oxford/research/orp/procedures.html

:sm170: وموفقين بإذن الله :sm170:

[العبسي]

بسم الله الرحمن الرحيم
تسلمين يااختنا الملكه(( لانه لكل مملكه ملك وتنت ملكه مختبرك))) على هالترتيب الرائع والمواقع

[مختبري مملكتي]

جزاك الله كل خير أخي العبسي وإن شاء الله تكونوا استفدتوا من مشاركتي

[lolo7]

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته
بسم الله الرحمن الرحيم شكرا لك اختنا العزيزة على المواقع المفيدة والمعلومات الهامة وجزاكي الله خيرا على هذه المعلومات الهامة ووفقكم الله