Some Words About Gram Stain

[DR.MICROBE]

ماهي صبغة جرام ؟
ماهي مكوناتها ؟
كيفية استخدامها ؟
ابرز فوائدها ؟

باختصاااار اليوم لو تكرمتوا ...

[HIV]

مستعجل يادكتور ض1

هذا الرسمه بتختصر الكثير من الهرج ض1
http://www.rlc.dcccd.edu/mathsci/reynolds/micro/lab_manual/gram_proc.jpg

صبغة جرام؟؟
هي صبغه تصنف مجموعتين من البكتيريا

ماهي مكوناتها ؟
>>> شوف الصوره


كيفية استخدامها ؟
نوضع البكيتريا على السلايد ونجففها وبعدين نصبغها
دقيقه بالـ Crystal Violet وتغسله بالماء
دقيقه بالـIodine وتغسله بالماء
5 ثواني بالـ Alchol وتغسله بالماء
30 ثانيه بالــ Safranin وتغسله بالماء
وبعدين تجفف وتقرا تحت الميكروسكوب على 100X
وبالهناء والعافيه ض1

[الغزال الشارد]

اهلين اخوي

بشرحلك ببساطه الى اعرفه

طبعا gram stain هو diffrentional stain

تستخدم للتفريق بين البكتيريا او تقسيمها
وبتعطيك يا + او -

طبعا ولكل واحد بيتبعه قروبات مختلفه من البكتيريا
وهي غالبا اول خطوه تسويها لما تجيك العينه
انك تشوف هل هي بوزتف او نقتف علشان تقدر تعرف وش البايوكيمكل والبليت الي تستخدمها

طيب نجي لكيف تتسوى

اول شي على سلايد نضيف تسوي ليبل وهذي اهم خطوه
بعدها تحط نقطه من السيلاين وتاخذ بلوب تسرايل من الكلشر او العينه وتسوي سبريد على السلايد
وبعدها تسوي فكسيشن على الجهاز وتتركها لمدة 10 دقايق تقريبا

بعد كذا تصبغها على اربع مراحل
الاول
crystal violet وهذا stain لمده دقيقتين الى 3 دقايق
بعدها نسوي غسيل للسلايد
وتحط iodein الي هوmordant
لمده دقيقه يمكن
وبعدها وش
وتحط استون الي هو دي كلورايزر وبالخطوه تكون مرة سريع يعني فيو سيكند
نسوي وش بسرعه لان ممكن تعطيك فولز نقتف بعدين :)
اخر شي تحط الصفرانين الي هو كاونتر ستين لمده دقيقه
وتسوي ووش بعدين تكشف عليها تحت المايكروسكوب

بعد الكشف ممكن يطلعلك احتمالين زي ماقلت اول

يا +
الي هو يكون لونها موف او بنفسجي
وهذا لان الكريستل فويلت يدخل داخل الخليه ويصبغها

او -
وبيكون لونها بهالحاله احمر
لان الكريستل فايلوت ماقدر يدخل داخل الخليه لوجود اللبد في الجدار حقها
ولما نسوي ووش بيروح وبعدها يدخل الصفرانين ويعطي الللون الاجمر

8
8
8

هذا الي عندي
وان شاء الله يكون واضح ومفيد لك
واي استفسار انا مستعد :)

[الغزال الشارد]

ياي مره خطيره الصورة اتش اي في
وانا جالسه ساعه اتفلسف
بس ياويلك لو جيت وقلت مافهمت
والفرق بيننا بالاوقات
مدري احسها متفاوته :)

[DR.MICROBE]

يعطيكم الف عافيه بس هناك بدائل تستخدم عوضاً عن الصفرانين وبنسب مختلفه ياليت توضحوا ....
تحياتي ,,,,

[راعي ميكروبات]

Crystal violet تدخل إلى جدار الخلية

Iodine يتفاعل مع Crystal violet ليكون معقد معه

الكحول يدخل إلى جدار الخلية فإذا المركب الأول قابل للذوبان في الكحول فانه يسذوب كل الصبغة من جدار الخلية

Safranin تدخل جدار الخلية وبذلك ستكو نالبكتيريا سالبة الجرام أما إذا لم تنزع الصبغة الاولى بواسطة الكحول تكون البكتيريا عند إذن هي موجبة لصبغة جرام



الفرق بين البكتيريا الموجبة والسالبة فالموجبة تحوي احماض امينية اقل من السالبة وتحوي مواد دهنية أقل من السالبة
والجدار الخلوي في الموجبة اقل تعقيداص من السالبة


الجدار الخلوي في الموجبة :
طبقة من Peptidoglycan
طبقة من Teichoic acid

الجدار الخلوي في السالبة :
طبقة من peptidoglycan
طبقة Lipo protein
طبقة lipo polysaccharides


المهم في عملية الصباغة عدم زيادة في تعريض الشريحة للكحول وذلك سوف يؤدي الى نتائج خاطئة




هذا بإختصار شديد جداً وآسف على التأخير


أتقد طريقة الصباغة سهلة جداً وإذا تبي طريقة الصباغة مفصلة أنا جاهز

[HIV]

ياي مره خطيره الصورة اتش اي في
وانا جالسه ساعه اتفلسف
بس ياويلك لو جيت وقلت مافهمت
والفرق بيننا بالاوقات
مدري احسها متفاوته :)

الا فهمت مسز زورو ض1
اما على الفرق اختي في الاوقات ... لما تدخلي المستشفى بتشوفي كيف اللعب بالوقت :sm188:
طبعا انا اسوي استين بدون الارم ولا حتى استخدم ساعتي في عد الوقت ... طبعا حساب تخيلا..:sm188:

وترى يعتمد على الــ Thickness of the smear

اذا كانت ضعيفه وخفيفه تقدري تقللي في الوقت
اما اذا كانت ثقيله فتزيدي الوقت ....

اما بالنسبه الى Alchol على حسب كل مستشفى في استخدامه .. بعضهم يستخدموه فقط Alchol
بعضهم يستخدم Aceton-Alchol والاخير ياخذ وقت اطول مقارنه بالاول :sm188:


DR,MICROBE
يعطيكم الف عافيه بس هناك بدائل تستخدم عوضاً عن الصفرانين وبنسب مختلفه ياليت توضحوا ....
تحياتي ,,,,



نعم يمكنك التغيير وهي تعتبر Counter stain
يقولوا انك تقدر تستخدم Neutral Red
ولكن بالنسبه لي ماشفته .... دائما اشوف السفرانين :sm188:







الفرق بين البكتيريا الموجبة والسالبة فالموجبة تحوي احماض امينية اقل من السالبة وتحوي مواد دهنية أقل من السالبة
والجدار الخلوي في الموجبة اقل تعقيداص من السالبة


الجدار الخلوي في الموجبة :
طبقة من Peptidoglycan
طبقة من Teichoic acid

الجدار الخلوي في السالبة :
طبقة من peptidoglycan
طبقة Lipo protein
طبقة lipo polysaccharides




اخوي راعي ميكروبات .....
يعجبني الشرح لما يكون بالبايوكمستري :sm188:
ومشكووور للشرح المفصل والواضح
سلااااااام

[راعي ميكروبات]

أخوي HIV وش رايك تنقل ردي بس للبايوكمستري :sm175:

ليش البكتيريا هذه تاخذ اللون البنفسجي وهذه تاخذ الأحمر طبعاً الموضوع يرجع لإختلاف الجدار الخلوي
وأنا شرحت لكم تركيب الجدار الخلوي (للسالبة والموجبة) والأختلاف واضح وهو سبب أكتساب لون الصغبة


العفـــــو أخوي HIV
دائما أتمنى أفيد الأخوان بقدر أستطاعتي وبعض الأحيان أرجع للمراجع وأترجم إذا لزم الأمر وممكن نصيب وممكن نخطيء لإني إنسان >>>>>> أكيد إنسان أجل وشو :sm174:

[ميدو المصرى]

السلام عليكم معاكم اخوكم ميدو المصرى
احب اقول لكم ان السبب اساسا فى عدم تلون الككتريا السلبه لصبغة جرام جود طبقة الدهون فى الجدار الخلوى الذى يسببعدم دخول صبغة الكريستال فيولت الى داخل الخليه :sm174:
الذى يسبب ازالهالصبغة الكحول بسهوله وبذلك تدخل الصفرانين بسهولة
وبذلك تظهلر باللون الاصفر

[ALBARG]

HIV روعه اخي في الرد

يعطيك العافيه

[khaled3320]

يقال أن الصبغه البنفسجه تنصبغ أثنا وجود كميه كبيره من Peptidoglycan لتكوين معقد يصعب على الكحول إزالته وهذا ما تتميز به البكتيريا الموجبه أما الوجود القليل من Peptidoglycan يسهل إزاله الصبغه البنفسجيه بواسطه الكحول وبالتالي تنصبغ البكتيريا بالصفرانين الحمراء .

ملاحظة:
وجود كميه من Peptidoglycan يجعل جدار الخليه سميك وقلت وجود Peptidoglycan يجعل سمك الجدار الخلوي رقيق


تقبلوا خالص التحيه

[MaD_SciEntisT]

مشكور لكل المعلومات القيمه اللى اضيفت فى الردود حبيت بس اضيف من ضمن الميكانزمات اللى بتحصل وبتخلى البكتريا + تحافظ ع الصبغه
طبعا من ضمن الحاجات اللى بستخدمها هو ethyl alcohol 95% او برده خليط منehtyl alcohol + aceton الكحول الايثيلى وظيفته بقى ايه ؟ طبعا احنا عارفين زى ما الاخوه مشكورين نوهو عن ان فى تركيب الجدار الخلوى للبكتريا طبقه من اللليبد
Decolrizing agent
this reagent has a dual function as a lipid solvent & as a protein dehydrating agent. Its action is detemind by the lipid conversion of the microbial cell wall. In Gram + there's a low lipid concentrationits important to the retention of the Mg-RNA-CV-I complex . THerefore the small amount of lipid is readially dissolved by the action of the alcohol, causing the formation of minute cell wall PORES..then are then closed by the action of the alcohol's dehaydrating effect .AS a consequance the primary stain (crystal violot) is difficult 2 REMOVE ..........In gram - there's a high lipd concentration is dissolved by the alcohol creating a large pores in the cell wall that cannt be closed on dehydartion of cell wall protein.... This facelitate the release ofCV-I complex leaving the cell COLOURLESS

[علة الكون]

الف شكر وتحية