التلوين التفريقي
تختلف الكائنات الحية الدقيقة فيما بينها ساء من الناحية الكيميائية أو الفيزيائية فهي تتفاعل بطريقة مختلفة مع الملونات فالتلوين التفريقي طريقة تمكن من تبين مختلف أنواع البكتيريا.
1_تلوين غرام Gram:تلوين غرام أكثر التقنيات المستعملة لتحديد الأجناس البكتيرية ,فقد أصبحت هذه التقنية قاعدة عامة في دراسة البكتيريا وهذا لتشخيص وتصنيف الأجناس البكتيريا الموجودة كما تحدد نوعها غرام + أو غرام – حسب احتفاظها أو عدم احتفاظها بالون البنفسجي .
*تحضير المسحة:
أ_الطرح:توضع المسحة البكتيريا على شريحة نظيفة مزالة الدهن,ان لم تكن كذلك تنظف بورق مبلل بالكحول ,توضع قطرة ماء مقطر على الشريحة ثم تمزج معها كمية ضئيلة من مزرعة بكتيريا بعمر 24سا.
ب_ التجفيف:تمرر الشريحة بسرعة عدة مرات على شعلة هادئة وذلك لتجنب جفاف المسحة.
ج_التثبيت:الهدف من التثبيت هو قتل البكتيريا وجعلها تلتصق بالشريحة وذلك بتخثر البروتينات ,تغمر المسحة البكتيريا المجففة بالكحول لمدة 15_30ثانية ثم توهج وتترك لتبرد.
*تلوين غرامGram :
- تغطى المسحة المثبتة بالون البنفسجي violet de gentiane لمدة 3 دقائق.
- نتخلص بعدها من الملون باستعمال الماء المقطر.
- تغطى المسحة باليود اليوديLugol لمدة دقيقة واحدة ثم نغسل أيضا
- تغطى المسحة بالكحول لبضعة ثواني لإزالة الملون ثم تغسل المسحة بالماء المقطر
- تغطى المسحة بالملون الثاني الوردي fuschine لمدة 30ثانية ثم نغسل المسحة بالماء المقطر.
- تجفف الشريحة بورق تجفيف
- تفحص الشريحة بالتكبير 40ثم بالتكبير 100 باستعمال زيت الغمر
النتيجة: البكتيريا غرام (+) تحتفظ باللون البنفسجي بعد إزالة الملون بالكحول
البكتيريا غرام (–) تفقد اللون البنفسجي بعد إزالة الملون بالكحول وتتلون باللون الوردي,
*تلوين البوغة:بعض الأنواع البكتيرية تشكل جسيمات مقاومة مميزة "الأبواغ"إذا كانت الظروف غير ملائمة
لهذه الأبواغ معامل انكسار مميز نتيجة احتوائها على كمية قليلة من الماء ,تقاوم هذه الأبواغ الظروف الفيزيائية و الكيميائية للوسط أحسن من الخلايا فهي تتميز بكونها مقاومة للحرارة.
طريقة التلوين:يتم التلوين كالتالي:
- تحضر مسحة بكتيريا وتثبت على الشريحة كما في تلوين غرام
- تغطى المسحة بملون أخضر الملاكيت "vert de malachite"0.5% ثم تسخن الشريحة على نار هادئة لبضعة دقائق حتى يتصاعد بخار أبيض مع تجنب جفاف الشريحة وتترك لتبرد
- يغسل الملون بالماء المقطر
- تغطى الشريحة بالملون الوردي fuschine لمدة دقيقة
- تغسل الشريحة بالماء المقطر وتجفف بورق تجفيف
- تفحص المسحة البكتيريا تحت التكبير 100 بزيت الغمر
النتيجة:تكون الأبواغ الملونة بالأخضر إما طليقة أو داخل أجسام بكتيريا وردية.
*تلوين المحفظة:لبعض الأنواع البكتيرية بنية خارج الغشاء تسمى المحفظة,وهي طبقة سميكة نوعا ما يساهم الوسط في تشكيلها "سكريات,جو غني بثاني أكسيد الكربون "حسب الحالة فهي إما أن تكون من متعددات السكريات أو من البروتينات ,وتمنح البكتيريا خصائص مميزة"مقاومة الجفاف ,القدرة على الإمراضية"
طريقة التلوين:
-يحضر معلق بكتيري على شريحة انطلاقا من مستعمرة معزولة.
-تضاف قطرة من أحمر الكونغوroug kongo "" وتغطى بساترة.
-تفحص المسحة تحت تكبير 40دون استعمال زيت الغمر.
النتيجة:تظهر المحفظة كهالة باهتة تحيط بالبكتيريا الملونة ورديا بأحمر الكونغو.
أتمنى ان تستفيدو من هذا الشرح البسيط:sm182:
تختلف الكائنات الحية الدقيقة فيما بينها ساء من الناحية الكيميائية أو الفيزيائية فهي تتفاعل بطريقة مختلفة مع الملونات فالتلوين التفريقي طريقة تمكن من تبين مختلف أنواع البكتيريا.
1_تلوين غرام Gram:تلوين غرام أكثر التقنيات المستعملة لتحديد الأجناس البكتيرية ,فقد أصبحت هذه التقنية قاعدة عامة في دراسة البكتيريا وهذا لتشخيص وتصنيف الأجناس البكتيريا الموجودة كما تحدد نوعها غرام + أو غرام – حسب احتفاظها أو عدم احتفاظها بالون البنفسجي .
*تحضير المسحة:
أ_الطرح:توضع المسحة البكتيريا على شريحة نظيفة مزالة الدهن,ان لم تكن كذلك تنظف بورق مبلل بالكحول ,توضع قطرة ماء مقطر على الشريحة ثم تمزج معها كمية ضئيلة من مزرعة بكتيريا بعمر 24سا.
ب_ التجفيف:تمرر الشريحة بسرعة عدة مرات على شعلة هادئة وذلك لتجنب جفاف المسحة.
ج_التثبيت:الهدف من التثبيت هو قتل البكتيريا وجعلها تلتصق بالشريحة وذلك بتخثر البروتينات ,تغمر المسحة البكتيريا المجففة بالكحول لمدة 15_30ثانية ثم توهج وتترك لتبرد.
*تلوين غرامGram :
- تغطى المسحة المثبتة بالون البنفسجي violet de gentiane لمدة 3 دقائق.
- نتخلص بعدها من الملون باستعمال الماء المقطر.
- تغطى المسحة باليود اليوديLugol لمدة دقيقة واحدة ثم نغسل أيضا
- تغطى المسحة بالكحول لبضعة ثواني لإزالة الملون ثم تغسل المسحة بالماء المقطر
- تغطى المسحة بالملون الثاني الوردي fuschine لمدة 30ثانية ثم نغسل المسحة بالماء المقطر.
- تجفف الشريحة بورق تجفيف
- تفحص الشريحة بالتكبير 40ثم بالتكبير 100 باستعمال زيت الغمر
النتيجة: البكتيريا غرام (+) تحتفظ باللون البنفسجي بعد إزالة الملون بالكحول
البكتيريا غرام (–) تفقد اللون البنفسجي بعد إزالة الملون بالكحول وتتلون باللون الوردي,
*تلوين البوغة:بعض الأنواع البكتيرية تشكل جسيمات مقاومة مميزة "الأبواغ"إذا كانت الظروف غير ملائمة
لهذه الأبواغ معامل انكسار مميز نتيجة احتوائها على كمية قليلة من الماء ,تقاوم هذه الأبواغ الظروف الفيزيائية و الكيميائية للوسط أحسن من الخلايا فهي تتميز بكونها مقاومة للحرارة.
طريقة التلوين:يتم التلوين كالتالي:
- تحضر مسحة بكتيريا وتثبت على الشريحة كما في تلوين غرام
- تغطى المسحة بملون أخضر الملاكيت "vert de malachite"0.5% ثم تسخن الشريحة على نار هادئة لبضعة دقائق حتى يتصاعد بخار أبيض مع تجنب جفاف الشريحة وتترك لتبرد
- يغسل الملون بالماء المقطر
- تغطى الشريحة بالملون الوردي fuschine لمدة دقيقة
- تغسل الشريحة بالماء المقطر وتجفف بورق تجفيف
- تفحص المسحة البكتيريا تحت التكبير 100 بزيت الغمر
النتيجة:تكون الأبواغ الملونة بالأخضر إما طليقة أو داخل أجسام بكتيريا وردية.
*تلوين المحفظة:لبعض الأنواع البكتيرية بنية خارج الغشاء تسمى المحفظة,وهي طبقة سميكة نوعا ما يساهم الوسط في تشكيلها "سكريات,جو غني بثاني أكسيد الكربون "حسب الحالة فهي إما أن تكون من متعددات السكريات أو من البروتينات ,وتمنح البكتيريا خصائص مميزة"مقاومة الجفاف ,القدرة على الإمراضية"
طريقة التلوين:
-يحضر معلق بكتيري على شريحة انطلاقا من مستعمرة معزولة.
-تضاف قطرة من أحمر الكونغوroug kongo "" وتغطى بساترة.
-تفحص المسحة تحت تكبير 40دون استعمال زيت الغمر.
النتيجة:تظهر المحفظة كهالة باهتة تحيط بالبكتيريا الملونة ورديا بأحمر الكونغو.
أتمنى ان تستفيدو من هذا الشرح البسيط:sm182:
تعليق