إعـــــــلان

تقليص
لا يوجد إعلان حتى الآن.

لاول مرة خطوات تجربة علمية لزراعة البكتيريا وإحصائها " عدها "

تقليص
X
 
  • تصفية - فلترة
  • الوقت
  • عرض
إلغاء تحديد الكل
مشاركات جديدة

  • لاول مرة خطوات تجربة علمية لزراعة البكتيريا وإحصائها " عدها "

    السلام عليكم ورحمة الله وبركاته
    اقدم اليكم هذا الملف عسى الله ان ينفعنا واياكم
    ولاتنسونا بدعواتكم الطيبه


    مع خالـــــــــــــــــــــــــــــــص تحياتي
    السنوسي احموده احمد
    اخصائي تحاليل طبيه
    سبها /ليبيا

    sonuci_2010 libya-sebha

    -------------------------------------------------------------------------

    كاتب خطوات التجربة :
    بروفسور دالية كريخلي و د. ميخال مندلوفيتش
    مقدمة لابد منها :
    طرق الوقاية بالمختبر
    اقرأ بتمعن شديد وتصرف حسب هذه الإرشادات :
    1. قبل قدومك للمختبر, اقرأ التجربة جيداً بما في ذلك المقدمة النظرية وكذلك طرق العمل وافهم جيدا كل ما ورد . أثناء التجربة اقرأ كل بند وافهمه قبل أن تبدأ بالعمل . أستعن بالمرشدين للإجابة عن أي استفسار أو سؤال يواجهك.
    2. لا تقم بعمل أي شيء لم يطلب منك عمله بشكل واضح في التعليمات أو عن طريق المعلم, مرشد أو فني المختبر. نشكرك على التعاون, ولكن أولاً يجب استشارة أعضاء الهيئة الدراسية الموجودين تحت تصرفك في المختبر, انك تعمل مع أجهزة غالية جداً ومواد خطرة. إن عدم الانصياع للتعليمات و∕ أو تصرف غير لائق من الممكن أن يؤدي إلى كارثة !!
    3. لا تستخدم الفم ولا بأي حال من الأحوال لضخ السوائل بالماصة, استخدم فقط ماصة اتوماتيكية أو مضخة خضراء. انتبه, خلال إدخال الماصة إلى المضخة الخضراء, أمسك الماصة من الجزء العلوي, لا تستخدم قوة زائدة في إدخال الماصة لئلا تنكسر وتجرحك.
    4. لا يجوز الشرب ∕ الأكل∕ التدخين في المختبر!
    5. معالجة الأدوات المستخدمة والنفايات:
    • كل النفايات التي تتلامس مع مادة بكتيرية- ادخلها إلى كيس مكتوب عليه" نفايات بكتيرية للإبادة" .
    • كل أداة تتلامس مع مادة بكتيرية أدخلها إلى الوعاء الموضوع بجانب المغسلة, هذه الأدوات سوف يتم غسلها وتعقيمها.
    • كل النفايات التي لم تتلامس مع مادة بكتيرية- ادخلها إلى صندوق القمامة العلم الأوعية التي لم تتلامس مع مادة بكتيرية- اتركها فوق الصينية بصورة مرتبة.
    6. احرص على غسل يديك بالماء والصابون بنهاية المختبر.
    7. في حالة أي عطل بما في ذلك عدم انتظام الجهاز, استدع أي شخص من الأعضاء المرشدين فوراً.
    هدف التجربة The Experiment Purpose
    1. معرفة طرق عد (إحصاء) خلايا البكتيريا .
    2. معرفة طرق صبغ خلايا البكتيريا .
    3. قياس منحنى نمو لخلايا البكتيريا (growth curve).
    4. التعرف على تأثير بعض العوامل على معدل نمو البكتيريا من نوع E.coli و Bacillus stearothermophilus
    في هذا المختبر سوف نقوم بالأمور التالية:
    ‌أ. تنمية البكتيريا E.coli من نوع B بثلاثة درجات حرارة مختلفة: بدرجة حرارة 37 ◦م وهي درجة الحرارة المثالية لهذه البكتيريا، بدرجة حرارة 55 درجة مئوية، وبدرجة حرارة الغرفة. كذلك سوف ننمي البكتيريا بوسط غذائي فقير، بتركيز ملح عالي، بظروف لا هوائية وبوجود مواد مضادة مختلفة Antibiotic. كذلك سوف ننمي البكتيريا Bacillus stearothermophilus بدرجتين مختلفتين من الحرارة. خلال فترة النمو سوف تأخذ عينة كل 20 دقيقة من أجل قياس درجة التعكر.
    ‌ب. أثناء فترة الانتظار، وعندما تعطى لك التعليمات سوف تقوم بعملية صبغة جرام gram للبكتيريا E.coli و Bacillus subtilus ، كذلك سوف تقوم بصبغة جرام لعينة تؤخذ من اللأسنان.
    ‌ج. القيام بالعد الحي للبكتيريا بواسطة سلسلة تخفيفات وزراعة البكتيريا على الصحون.

    لكي نقوم بتغطية كل هذه الإمكانيات، كل مجموعة ستقوم بتنفيذ ظروف مختلفة عن الأخرى وفي النهاية سنجمع نتائج كل الفرق.

    شرح عام General Explanation
    بغرفة المختبر هنالك 3 أحواض مائية متحركة كل واحد ذو درجة حرارة مختلفة: 37°C، 55°C ودرجة حرارة الغرفة. في كل مجموعة يوجد على الطاولة 5 أنابيب والتي تحوي بداخلها وسط غذائي لنمو البكتيريا. لكل مجموعة ملصقة بلون مختلف لكي نمنع الالتباس. الأنابيب معلمة بالأحرف A, B, C, D, E. الانابيب A,B,C مخصصة لفحص تأثير الحرارة على نمو البكتيريا وسوف نستعملها لتربية البكتيريا E.coli بثلاثة درجات حرارة مختلفة. الأنبوب A بـ37°C، B بدرجة حرارة الغرفة أما C ففي درجة حرارة 55°C. بالأنابيب D و E سوف تقوم كل مجموعة بفحص متغير إضافي حسب، الآتي:
    مجموعة أ : سوف تفحص معدل نمو البكتيريا E.coli بوسط غذائي فقير.
    مجموعة ب : سوف تفحص نمو E.coli بتركيز ملح عالي و بظرف شبه لاهوائي.
    مجموعة ج : سوف تقارن نمو E.coli حساس ومقاوم للأمبتسلين بوجود المادة المضادة أمبتسلين.
    مجموعة د : : سوف تفحص نمو E.coli بوجود المادتين المضادتين ستربتوميتسين و كلورمفنيكول.
    مجموعة ه : سوف نفحص نمو Bacillus stearothermophilus بدرجتا حرارة.

    عليك أن تفحص إلى أي مجموعة تنتمي وان تتصرف حسب التعليمات الخاصة بمجموعتك.
    مجرى التجربة The procedure
    • زراعة البكتيريا في الأنابيب.
    • قرائة درجة التعكر للبكتيريا ببداية التجربة ( زمن 0).
    • تنمية البكتيريا بالأحواض المائية.
    • قياس درجة التعكر بالسبكتروفوتومتر كل 20 دقيقة لمدة 100 دقيقة أو 120.
    • بعد قياس زمن 20 دقيقة سوف نقوم بعملية صبغ جرام.
    • بعد قياس زمن 40 و80 ستأخذ عينة للعد الحي:
    o العينة ستمر بسلسلة تخفيفات.
    o زراعة 3 صحون بتخفيضات 10–4 , 10-5 10-6.
    o عملية عد المستعمرات ستنفذ بعد 24 ساعة على الأقل من زراعتها.

    إجمالا عليك القيام بثلاث مهام: 1. منحنى لنمو البكتيريا. 2. صبغة جرام. 3. عد حي للبكتيريا.
    -------------------------------------------------------------
    مجموعة أ
    زرع البكتيريا في الأنابيب
    1. أضف لكل الأنابيب من A إلى E ، بصورة معقمة بقرب النار، 500µl (ميكرولتر) بكتيريا E.coli من أنبوبة البكتيريا الموجودة بسلة الثلج.
    2. إمزج محتوى الأنابيب جيدا بواسطة التحريك بجهاز الـڤورتكس.
    قياس الزمن 0:
    3. أضبط جهاز السبكتروفوتومتر بطول موجة . 600 nm
    4. أضبط على الصفر جهاز السبكتروفوتومتر بمساعدة الأنبوب الذي يحتوي على سائل LB (وسط غذائي) الموجود على حامل الأنابيب (بمساعدة المرشد).
    5. قم بقياس درجة الإبتلاع (درجة التعكر) للأنابيب بالسبكتروفوتومتر (بمساعدة المرشد). إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك ( وذلك لكي لا تتأثر القرائة بالإختلافات بين جدار الأنبوب). قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    تربية البكتيريا:
    6. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب:
    الأنابيب A، D و E للحوض ذو درجة حرارة 37°C.
    الانبوب B للحوض ذو درجة حرارة 25°C.
    الانبوب C للحوض ذو درجة حرارة 55°C.
    تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    7. اضبط الساعة (TIMER) لـ 20 دقيقة وشغله.
    8. بالوقت المتبقي قم بعملية صبغ جرام حسب التعليمات لصبغ جرام بصفحة 19.
    قياس الزمن 20 دقيقة
    9. عند سماعك رنين الساعة قم بإخراج انابيب فرقتك من الاحواض المائية المختلفة.
    10. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    11. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب بالسبكتروفوتومتر. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    12. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    13. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    14. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    قياس الزمن 40 دقيقة
    15. عند سماعك رنين الساعة أخراج الانابيب من الاحواض المائية.
    16. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    17. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    18. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    أخذ عينة للعد الحي:
    19. أكتب على انبوب إبندوف "1a".
    20. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    21. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب A ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1a. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    22. ارمي التيب.
    23. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    24. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    25. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.
    قياس الزمن 60 دقيقة:
    26. أعد المراحل من 9 الى 14.
    قياس الزمن 80 دقيقة:
    27. أعد المراحل من 9 الى 12.
    أخذ عينة للعد الحي:
    28. أكتب على انبوب إبندوف "1b".
    29. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    30. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب A ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1b. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    31. ارمي التيب.
    32. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    33. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    34. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.
    قياس الزمن 100 دقيقة:
    35. أعد المراحل من 9 الى 14.
    36. إذا كانت هنالك حاجة (او اذا رغبت بذلك) أضف 20 دقيقة أخرى لنمو البكتيريا.
    -------------------------------------------------------------
    مجموعة ب
    زرع البكتيريا في الأنابيب
    1. أضف لكل الأنابيب من A إلى D ، بصورة معقمة بقرب النار، 500µl (ميكرولتر) بكتيريا E.coli من أنبوبة البكتيريا الموجودة بسلة الثلج. للانبوب E أضف 2 ملل بكتيريا (2 X 1000µl).
    2. إمزج محتوى الأنابيب A الى D بواسطة الـڤورتكس. اما الانبوب E فاغلق بواسطة ورق البرافيلم الشفاف، ثم امزج الانبوب بواسطة قلب الانبوب بلطف. ابقي ورق البرافيلم على الانبوب وذلك لمنع الهواء من الدخول الى الانبوب.
    قياس الزمن 0:
    3. أضبط جهاز السبكتروفوتومتر بطول موجة . 600 nm
    4. أضبط على الصفر جهاز السبكتروفوتومتر بمساعدة الأنبوب الذي يحتوي على سائل LB (وسط غذائي) الموجود على حامل الأنابيب (بمساعدة المرشد).
    5. قم بقياس درجة الإبتلاع (درجة التعكر) للأنابيب بالسبكتروفوتومتر (بمساعدة المرشد). إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك ( وذلك لكي لا تتأثر القرائة بالإختلافات بين جدار الأنبوب). قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    تربية البكتيريا:
    6. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب:
    الأنابيب A و D للحوض ذو درجة حرارة 37°C.
    الانبوب B للحوض ذو درجة حرارة 25°C.
    الانبوب C للحوض ذو درجة حرارة 55°C.
    تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    7. ادخل الانبوب E الى الحاضن بدرجة حرارة 37°C (استعن بالمرشد).
    8. اضبط الساعة (TIMER) لـ 20 دقيقة وشغله.
    9. بالوقت المتبقي قم بعملية صبغ جرام حسب التعليمات لصبغ جرام بصفحة 19.
    قياس الزمن 20 دقيقة:
    10. عند سماعك رنين الساعة قم بإخراج انابيب فرقتك من الاحواض المائية ومن الحاضن.
    11. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    12. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب بالسبكتروفوتومتر. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    13. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    14. ادخل الأنابيب A إلى D لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!. ارجع الانبوب E الى الحاضن.
    15. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    قياس الزمن 40 دقيقة:
    16. عند سماعك رنين الساعة أخراج الانابيب من الاحواض المائية ومن الحاضن.
    17. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    18. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    19. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    أخذ عينة للعد الحي:
    20. أكتب على انبوب إبندوف "1a".
    21. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    22. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب A ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1a. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    23. ارمي التيب.
    24. ادخل الأنابيب A إلى D لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!. ارجع الانبوب E الى الحاضن.
    25. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    26. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.
    قياس الزمن 60 دقيقة
    27. أعد المراحل من 10 الى 15.
    قياس الزمن 80 دقيقة
    28. أعد المراحل من 10 الى 13.
    أخذ عينة للعد الحي:
    29. أكتب على انبوب إبندوف "1b".
    30. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    31. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب A ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1b. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    32. ارمي التيب.
    33. ادخل الأنابيب A إلى D لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!. ارجع الانبوب E الى الحاضن.
    34. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    35. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.
    قياس الزمن 100 دقيقة:
    36. أعد المراحل من 10 الى 15.
    37. إذا كانت هنالك حاجة (او اذا رغبت بذلك) أضف 20 دقيقة أخرى لنمو البكتيريا.
    --------------------------------------------
    مجموعة ج
    زرع البكتيريا في الأنابيب
    1. أضف لكل الأنابيب من A إلى D ، بصورة معقمة بقرب النار، 500µl (ميكرولتر) بكتيريا E.coli من أنبوبة البكتيريا الموجودة بسلة الثلج. للانبوب E أضف 0.3 ملل (300µl) من البكتيريا المعلمة بـ "مقاومة".
    2. إمزج محتوى الأنابيب جيدا بواسطة التحريك بجهاز الـڤورتكس.

    قياس الزمن 0:
    3. أضبط جهاز السبكتروفوتومتر بطول موجة . 600 nm
    4. أضبط على الصفر جهاز السبكتروفوتومتر بمساعدة الأنبوب الذي يحتوي على سائل LB (وسط غذائي) الموجود على حامل الأنابيب (بمساعدة المرشد).
    5. قم بقياس درجة الإبتلاع (درجة التعكر) للأنابيب بالسبكتروفوتومتر (بمساعدة المرشد). إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك ( وذلك لكي لا تتأثر القرائة بالإختلافات بين جدار الأنبوب). قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.

    تربية البكتيريا:
    6. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب:
    الأنابيب A، D و E للحوض ذو درجة حرارة 37°C.
    الانبوب B للحوض ذو درجة حرارة 25°C.
    الانبوب C للحوض ذو درجة حرارة 55°C.
    تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    7. اضبط الساعة (TIMER) لـ 20 دقيقة وشغله.
    8. بالوقت المتبقي قم بعملية صبغ جرام حسب التعليمات لصبغ جرام بصفحة 19.

    قياس الزمن 20 دقيقة:
    9. عند سماعك رنين الساعة قم بإخراج انابيب فرقتك من الاحواض المائية المختلفة.
    10. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    11. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    12. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    13. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    14. شغل الساعة لـ20 دقيقة.

    قياس الزمن 40 دقيقة:
    15. عند سماعك رنين الساعة أخراج الانابيب من الاحواض المائية.
    16. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    17. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    18. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.

    أخذ عينة للعد الحي:
    19. أكتب على انبوب إبندوف "1a".
    20. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    21. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب D ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1a. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    22. ارمي التيب.

    إضافة المادة المضادة:
    23. اضف الى الانابيب D و E 100µl امبتسلين.
    24. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    25. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    26. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.

    قياس الزمن 60 دقيقة:
    27. أعد المراحل من 9 الى 14.

    قياس الزمن 80 دقيقة:
    28. أعد المراحل من 9 الى 12.

    أخذ عينة للعد الحي:
    29. أكتب على انبوب إبندوف "1b".
    30. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    31. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب D ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1b. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    32. ارمي التيب.
    33. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    34. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    35. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.

    قياس الزمن 100 دقيقة:
    36. أعد المراحل من 9 الى 14.
    37. إذا كانت هنالك حاجة (او اذا رغبت بذلك) أضف 20 دقيقة أخرى لنمو البكتيريا.
    -------------------------------------------------------------
    جموعة د
    زرع البكتيريا في الأنابيب
    1. أضف لكل الأنابيب من A إلى E ، بصورة معقمة بقرب النار، 500µl (ميكرولتر) بكتيريا E.coli من أنبوبة البكتيريا الموجودة بسلة الثلج.
    2. إمزج محتوى الأنابيب جيدا بواسطة التحريك بجهاز الـڤورتكس.

    قياس الزمن 0:
    3. أضبط جهاز السبكتروفوتومتر بطول موجة . 600 nm
    4. أضبط على الصفر جهاز السبكتروفوتومتر بمساعدة الأنبوب الذي يحتوي على سائل LB (وسط غذائي) الموجود على حامل الأنابيب (بمساعدة المرشد).
    5. قم بقياس درجة الإبتلاع (درجة التعكر) للأنابيب بالسبكتروفوتومتر (بمساعدة المرشد). إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك ( وذلك لكي لا تتأثر القرائة بالإختلافات بين جدار الأنبوب). قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.

    تربية البكتيريا:
    6. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب:
    الأنابيب A، D و E للحوض ذو درجة حرارة 37°C.
    الانبوب B للحوض ذو درجة حرارة 25°C.
    الانبوب C للحوض ذو درجة حرارة 55°C.
    تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    7. اضبط الساعة (TIMER) لـ 20 دقيقة وشغله.
    8. بالوقت المتبقي قم بعملية صبغ جرام حسب التعليمات لصبغ جرام بصفحة 19.

    قياس الزمن 20 دقيقة:
    9. عند سماعك رنين الساعة قم بإخراج انابيب فرقتك من الاحواض المائية المختلفة.
    10. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    11. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    12. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    13. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    14. شغل الساعة لـ20 دقيقة.

    قياس الزمن 40 دقيقة:
    15. عند سماعك رنين الساعة أخراج الانابيب من الاحواض المائية.
    16. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    17. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    18. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.

    أخذ عينة للعد الحي:
    19. أكتب على انبوب إبندوف "1a".
    20. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    21. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب D ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1a. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    22. ارمي التيب.

    إضافة المادة المضادة:
    23. اضف الى الانابيب D 100µl ستربتوميتسين.
    24. اضف الى الانابيب E 100µl كلورمفنيكول.
    25. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    26. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    27. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.

    قياس الزمن 60 دقيقة:
    28. أعد المراحل من 9 الى 14.

    قياس الزمن 80 دقيقة:
    29. أعد المراحل من 9 الى 12.

    أخذ عينة للعد الحي:
    30. أكتب على انبوب إبندوف "1b".
    31. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    32. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب D ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1b. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    33. ارمي التيب.
    34. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    35. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    36. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.

    قياس الزمن 100 دقيقة:
    37. أعد المراحل من 9 الى 14.
    38. إذا كانت هنالك حاجة (او اذا رغبت بذلك) أضف 20 دقيقة أخرى لنمو البكتيريا.
    --------------------------------------------------
    مجموعة هـ
    زرع البكتيريا في الأنابيب
    1. أضف لكل الأنابيب من A إلى C ، بصورة معقمة بقرب النار، 500µl (ميكرولتر) بكتيريا E.coli من أنبوبة البكتيريا الموجودة بسلة الثلج. للانبوبD و E أضف 0.3 ملل (300µl) من البكتيريا المعلمة بـ "عاشقة الحر".
    2. إمزج محتوى الأنابيب جيدا بواسطة التحريك بجهاز الـڤورتكس.

    قياس الزمن 0:
    3. أضبط جهاز السبكتروفوتومتر بطول موجة . 600 nm
    4. أضبط على الصفر جهاز السبكتروفوتومتر بمساعدة الأنبوب الذي يحتوي على سائل LB (وسط غذائي) الموجود على حامل الأنابيب (بمساعدة المرشد).
    5. قم بقياس درجة الإبتلاع (درجة التعكر) للأنابيب بالسبكتروفوتومتر (بمساعدة المرشد). إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك ( وذلك لكي لا تتأثر القرائة بالإختلافات بين جدار الأنبوب). قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.

    تربية البكتيريا:
    6. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب:
    الأنابيب A، D و E للحوض ذو درجة حرارة 37°C.
    الانبوب B للحوض ذو درجة حرارة 25°C.
    الانبوب C للحوض ذو درجة حرارة 55°C.
    تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    7. اضبط الساعة (TIMER) لـ 20 دقيقة وشغله.
    8. بالوقت المتبقي قم بعملية صبغ جرام حسب التعليمات لصبغ جرام بصفحة 19.

    قياس الزمن 20 دقيقة:
    9. عند سماعك رنين الساعة قم بإخراج انابيب فرقتك من الاحواض المائية المختلفة.
    10. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    11. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    12. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.
    13. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    14. شغل الساعة لـ20 دقيقة.

    قياس الزمن 40 دقيقة:
    15. عند سماعك رنين الساعة أخراج الانابيب من الاحواض المائية.
    16. امسح الانابيب من الماء جيدا.
    17. قم بقياس درجة الإبتلاع للأنابيب. إحرص على إدخال الأنابيب بحيث أن الخط العمودي الموجود على الملصق يتجه نحوك.
    18. قم بتسجيل النتيجة بالجدول في الحاسوب.

    أخذ عينة للعد الحي:
    19. أكتب على انبوب إبندوف "1a".
    20. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    21. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب E الخاص بالمجموعة د ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1a. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    22. ارمي التيب.
    23. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    24. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    25. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.

    قياس الزمن 60 دقيقة:
    26. أعد المراحل من 9 الى 14.

    قياس الزمن 80 دقيقة:
    27. أعد المراحل من 9 الى 12.

    أخذ عينة للعد الحي:
    28. أكتب على انبوب إبندوف "1b".
    29. ضع تيب ابيض على الماصة الأتوماتيكية لـ100µl.
    30. اسحب 100 ميكرولتر (0.1 ملل) ،بجانب النار، من الأنبوب E الخاص بالمجموعة د ثم ادخل السائل الى الأنبوب 1b. هذا الانبوب سوف تستعمل فيما بعد لاجراء التخفيفات والزرع والعد الحي.
    31. ارمي التيب.
    32. ادخل كل أنبوب لداخل الحوض المائي المناسب. تأكد من تشغيل الإهتزاز بالأحواض!
    33. شغل الساعة لـ20 دقيقة.
    34. بالوقت المتبقي قم بأجراء سلسلة التخفيفات والزراعة حسب التعليمات بصفحة 20.

    قياس الزمن 100 دقيقة:
    35. أعد المراحل من 9 الى 14.
    36. إذا كانت هنالك حاجة (او اذا رغبت بذلك) أضف 20 دقيقة أخرى لنمو البكتيريا.
    ---------------------- sonuci_2010 sebha libya -----------------
    صبغة جرام Gram Stain
    ملاحظة : عملية الصبغ تسبب أوساخاً كثيرة. أثناء عملية الصبع إعمل بحذر، نفذ العمليات داخل الوعاء المناسب وحاول أن لا توسخ ما يحيط بك. الغسل بالماء فقط داخل الحوض (المغسلة)، البس القفازات أثناء العمل.

    قبل البدء بالصبغ يجب تثبيت البكتيريا.
    1. حضر 3 زجاجات حاملة نظيفة، علم الزجاجات بالأرقام 3, 2, 1. ضع قطعة شريط لاسق على الرقم حتى لا تمحى العلامات.
    2. خذ بواسطة أنبوبة باستير قطرة صغيرة من الأنبوب الذي يحتوي على E.coli وضعها على الزجاجة الحاملة رقم 1.
    3. انشر السائل على الزجاجة حتى تنتج طبقه دقيقة ومتجانسة.
    4. قم بنفس العملية مع مستنبت Bacillus sutilus . وضعه على الزجاجة الحاملة رقم 2.
    5. بواسطة عود أسنان خذ عينه من بين أسنانك ضعها على الزجاجة الحاملة الثالثة، أضف نقطة ماء وانشرها حتى تنتج طبقة دقيقة ومتجانسة.
    6. دع الزجاجات تجف بالهواء.
    7. عندما يجف سطح الزجاجات، مررها بسرعة، بحيث ان الجانب الذي وضعت عليه البكتيريا تتجه لأعلى، 3 مرات فوق لهب النار لكي تثبت البكتيريا.
    انتبه: التسخين لفترة طويلة يحرق البكتيريا ويشوه صورتها. الزجاجة يجب أن تكون دافئة وليست ساخنة.
    8. صبغ اساسي ادخل الزجاجات الحاملة لمحلول crystal violet لفترة 30 ثانية.
    9. أخرجها واغسلها بالماء داخل الحوض (بسرعة) .
    10. تثبيت اللون ادخل الزجاجات لمحول يود لفترة 40 ثانية .
    11. اغسل الزجاجات بالماء بالمغسلة.
    12. غسل الون اغسل الزجاجات بواسطة الكحول بالحوض لفترة 20-30 ثانية، توقف عندما يصبح الكحول المنزلق من السطح عديم اللون.
    13. اغسلها بالماء بالمغسلة.
    14. صبغ مضاد ادخل الزجاجات لمحلول السبرنين ( لون مضاد ) 30 ثانيه.
    15. اغسلها بالماء ونشفها جيدا بالورق (إمتصاص وليس مسح).
    16. ضع زجاجة صغيرة – غطاء.
    17. انظر تحت المجهر. إبدأ بتكبير 10X وانتقل للتكبير 40X. لا تستخدم التكبير 100X.


    العد الحي (تخفيفات وزرع)
    في هذه المرحلة سوف نقوم بزرع البكتيريا على صحون بتري والتي تحتوي على وسط غذائي صلب. سوف تقوم بزرع العينات التي أخذتها في القسم الاول من التجربة، والتي تحمل العلامات 1a و 1b (زمن 40 وزمن 80 على التوالي).
    لان عدد البكتيريا كبير جدا، يجب القيام بتخفيف تركيز العينة بطريقة متوالية وذلك لكي نحصل، بتخفيف واحد على الاقل، على عدد من البكتيريا التي يمكن عدها على صحن البتري. لكي نحصل على اعداد قليلة يجب تخفيف العينة مليون ضعف (10-6).
    *الإجراءات الآتية تشير الى الزراعة بزمن 40 دقيقة (1a)، لكي تزرع العينة 1b قم بنفس المراحل ولكن بدل كل a بـb .
    *نقل خلايا البكتيريا وزرعها يجب أن تتم بصورة معقمة بجانب النار.
    التخفيف:
    1. علم 5 أنابيب إبندروف بالارقام 2a, 3a, 4a, 5a, 6a
    2. ضع تيب ازرق على الماصة الأوتوماتيكية الخاصة بـ1000µl.
    3. اضف، بجانب النار، لكل الأنابيب (من رقم 2 الى 6) 900µl من الوسط الغذائي (LB) .
    4. اضف، بجانب النار، للانبوب 1a (التي حضرت بزمن 40) 900µl من الوسط LB.
    5. إمزج محتوى الأنابيب جيدا بواسطة جهاز الـڤورتكس.
    إنتبه! في هذه المرحلة خففت البكتيريا بـ10 اضعاف.
    6. ضع تيب ابيض على الماصة الأوتوماتيكية الخاصة بـ100µl.
    7. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب 1a وانقلهم الى الانبوب 2a.
    8. إمزج الأنبوب جيدا بواسطة جهاز الـڤورتكس.
    إنتبه! لقد خففت البكتيريا بـ10 اضعاف اخرى، لذلك فإن البكتيريا مخففة الآن بـ100 ضعف.
    9. ضع تيب ابيض جديد على الماصة الأوتوماتيكية الخاصة بـ100µl.
    10. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب 2a وانقلهم الى الانبوب 3a.
    11. إمزج الأنبوب جيدا بواسطة جهاز الـڤورتكس.
    12. ضع تيب ابيض جديد على الماصة الأوتوماتيكية الخاصة بـ100µl.
    13. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب 3a وانقلهم الى الانبوب 4a.
    14. إمزج الأنبوب جيدا بواسطة جهاز الـڤورتكس.
    15. ضع تيب ابيض جديد على الماصة الأوتوماتيكية الخاصة بـ100µl.
    16. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب 4a وانقلهم الى الانبوب 5a.
    17. إمزج الأنبوب جيدا بواسطة جهاز الـڤورتكس.
    18. ضع تيب ابيض جديد على الماصة الأوتوماتيكية الخاصة بـ100µl.
    19. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب 5a وانقلهم الى الانبوب 6a.
    20. إمزج الأنبوب جيدا بواسطة جهاز الـڤورتكس.
    إنتبه! لقد خففت البكتيريا بـ10 اضعاف 6 مرات متتالية، لذلك فإن البكتيريا بالانبوب 6a مخففة بمليون ضعف (1000000).

    زراعة البكتيريا على صحون البتري:
    1. علم ثلاثة صحون باسمك، وبالأرقام 4a, 5a, 6a.
    2. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب رقم 4a وانقلهم الى الصحن رقم 4a.
    3. ارم التيب المستعمل و ضع تيبا جديدا.
    4. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب رقم 5a وانقلهم الى الصحن رقم 5a.
    5. ارم التيب المستعمل و ضع تيبا جديدا.
    6. خذ، بجانب النار، 100µl من الأنبوب رقم 6a وانقلهم الى الصحن رقم 6a.
    7. ارم التيب.
    8. بجانب النار وبواسطة عصا معقم للزراعة، بحيث ان لكل صحن عصا مختلفة، وزع السائل بشكل متجانس على الصحن. اغلق الصحون والصق مع نعض بشريط لاسق.
    9. بعد 24 ساعة على الأقل قم بعد مستعمرات البكتيريا بكل صحن.

    إعداد النتائج :
    • اثناء قيامك بالتجربة، طلب منك ادخال النتائج الى الحاسوب وذلك لكي تتمكن من تتبع منحنيات النمو المختلفة. هذه المنحنيات تمثل مراحل نمو البكتيريا تحت ظروف مختلفة. بعد إدخال كل المعطيات، إطبع النتائج لكي ترفقها بالتقرير. خذ نتائج الأنابيب D و E من المجموعات الاخرى وأدخل هذه النتائج الى المكان المخصص بالجدول. علل الإختلافات في النمو تحت الظروف المختلفة.
    • صبغة جرام: تمعن بالرسومات التي رسمتها أثناء التجربة، اشرح الفروق بين الرسومات المختلفة.
    • العد الحي: قم بعد المستعمرات بكل صحن. احسب حاصل الضرب بين عدد المستعمرات و عامل التخفيف وسجل تركيز البكتيريا لـ1 ملل بكل واحد من الزمنين (تركيز خلايا البكتيريا بالعينة الأصلية). هل تتطابق نتائج العد الحي مع نتائج قياس درجة الإبتلاع (التعكر)؟ علل.
    http://www.yabdoo.com/users/623/gallery/1887_p65995.gif

    SONUCI_2010 LIBYA

    اللهم علمنا ما ينفعنا... وانفعنا بما علمتنا.. وزدنا علمًا...يا أكرم الأكرمين يا رب

  • #2
    جزاك الله خيرا
    http://www.facebook.com/MkhtbrAlshjayt?ref=hl

    تعليق


    • #3
      عونى يوسف


      http://www.yabdoo.com/users/623/gallery/1887_p65995.gif

      SONUCI_2010 LIBYA

      اللهم علمنا ما ينفعنا... وانفعنا بما علمتنا.. وزدنا علمًا...يا أكرم الأكرمين يا رب

      تعليق


      • #4
        جزاك الله خير على هذه الشرح التفصيلي وبارك الله فيك

        تعليق


        • #5
          رااااااااااااااااااااااائع جدا جعله الله في ميزان حسناتك
          احتاج له كثيرا هذه الفتره

          تعليق


          • #6
            بارك الله فيك وجزاك عنا خيرا

            تعليق


            • #7
              بارك الله فيك
              جوزيت خيراً
              http://www.gamr15.org/up/upfiles/7xI52536.gif

              تعليق


              • #8

                انشودة
                nadooosh
                حور العين

                جزاكمـ الله كل خير

                ووفقكـم في حيآتكـم العلمية والعملية

                سلامي لكـم

                http://www.yabdoo.com/users/623/gallery/1887_p65995.gif

                SONUCI_2010 LIBYA

                اللهم علمنا ما ينفعنا... وانفعنا بما علمتنا.. وزدنا علمًا...يا أكرم الأكرمين يا رب

                تعليق


                • #9

                  انشودة
                  nadooosh
                  حور العين

                  جزاكمـ الله كل خير

                  ووفقكـم في حيآتكـم العلمية والعملية

                  سلامي لكـم

                  http://www.yabdoo.com/users/623/gallery/1887_p65995.gif

                  SONUCI_2010 LIBYA

                  اللهم علمنا ما ينفعنا... وانفعنا بما علمتنا.. وزدنا علمًا...يا أكرم الأكرمين يا رب

                  تعليق


                  • #10
                    مشكور....


                    جزاك الله خيراً

                    تعليق


                    • #11

                      ms lazo0o0oza
                      جزاك الله خيرا

                      http://www.yabdoo.com/users/623/gallery/1887_p65995.gif

                      SONUCI_2010 LIBYA

                      اللهم علمنا ما ينفعنا... وانفعنا بما علمتنا.. وزدنا علمًا...يا أكرم الأكرمين يا رب

                      تعليق


                      • #12
                        يسلمووووووووووووووووووووووووو
                        جزااااااااااك الله الف خير
                        لاتحرمنا جديدك*_*

                        تعليق


                        • #13
                          ]


                          عزوف المغيب

                          بارك الله فيكم ع الردود الجميله وان شاء الله ربي ايوفقكم في حياتكم العلميه والعمليه




                          http://www.yabdoo.com/users/623/gallery/1887_p65995.gif

                          SONUCI_2010 LIBYA

                          اللهم علمنا ما ينفعنا... وانفعنا بما علمتنا.. وزدنا علمًا...يا أكرم الأكرمين يا رب

                          تعليق

                          يعمل...
                          X