إعـــــــلان

تقليص
لا يوجد إعلان حتى الآن.

أحتاج شرح محاضرة//Gene cloning in E.coli

تقليص
X
تقليص
 
  • الصفحة لـ 2
  • تصفية - فلترة
  • الوقت
  • عرض
إلغاء تحديد الكل
مشاركات جديدة
السابق 1 2 template التالي
  • #1

    أحتاج شرح محاضرة//Gene cloning in E.coli

    السلام عليكم
    لدي محاضرة في
    Gene cloning in E.coli

    ومحتاج احد عنده خلفيه يساعدني فيها الله يخليكم .

    المحاضرة تحتوي المحاور التالية
    Basic Cloning in E.coli






    وكل عام والجميع بخير والله يتقبل منننا ومنكم جميعا
    التعديل الأخير تم بواسطة أميرة يمنية; الساعة 19-11-2010, 07:09 PM. سبب آخر: اكثر وضوحا
    الكلمات الدلالية (Tags): لا يوجد
  • #2
    وعليكم السلام ورحمة الله وبركاته
    كل عام وأنت بألف خير
    ****************

    لعمل Cloning نحتاج الى

    DNA fragment + vector==>Rombenent DNA
    ==> replication of it in host cell==>isolation , sequencinf and purification

    لقطع قطعة ال DNA من العائل ووضعها في الناقل نحتاج الى انزيمات قاصة واخرى لاصقة

    المكونات الاساسية اللازمة للبلازميد الذي سيحمل قطعة الجين التي سيتم استنساخها
    في ال E.Coli مبينة في الشكل التالي



    Plasmid vectors contain
    a selectable gene such as ampr which encodes the enzyme
    lactamase and confers resistance to ampicillin

    sequence where DNA replication is initiated by hostcell enzymes.
    Inclusion of a synthetic polylinker containing the recognition sequences for
    several different restriction enzymes increases the versatility of a plasmid vector

    ***************
    ونكمل الشرح فيما بعد ان شاء الله
    كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

    تعليق

    • #3
      هلأ بشكل أساسي ال cloning يحتاج إى 3 عوامل رئيسية متل ما حكت المشرفة :
      1- قطعة ال DNA
      2- vector
      3- خلية مضيفة أو competent cells .
      طبعاً وتحتاج هذه التقانة إلى أمور أخرى مثل :
      1- restriction enzymes مناسب للبلاسميد المتسخدم
      2- طريقة لادخال ال recombinant DNA إلى الخلايا المضيفة مثل الصدمة الحرارية أو جهاز ال electroporation .
      طبعاً هاد الحكي مختصر كتير ومشرفتنا الغالية هي رح تتكفل بالباقي

      تعليق

      • #4
        سنتبع فيما يلي خطوات ال clonnining استعمال ال E.coli

        ستم ادخال قطعة ال DNA الى البلازميد باستعمال انزيمات معينة



        E.coli تخلط مع ال Recombenent DNA تحت ظروف معينة ( وجود cacl2+حرارة ) بعض البكتيريا
        سيدخلها البلازميد .. البلازميد يكون حامل للجين المضاد للبنسلين وبالتالي يمكن بسهولة عزل
        البكتيريا التي دخلها البلازميد عن طريق زرعها في بيئة تحوي بنسلين ... البكتيريا التي لم
        تأخذ البلازميد تموت لانها غير مقاومة للبنسلين اما التي احتوت البلازميد تعيش



        البلازميد يستطيع حمل 20 ك.ب تقريبا واحيانا يمكن ادخال DNA بحجم اكبر ان امكننا تجنب تكسير
        ال DNAباستعمال طرق معينة .. يقوم البلازميد الموجود في البكتيريا بالتضاعف عدة مرات ومن ثم
        يتم تضاعف البكتيريا لتعطي عدد اكبر يحمل نفس ال DNA






        ضع استفساراتك حول الموضوع وان شاء الله نحاول ان نجيب عليها
        كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

        تعليق

        • #5
          ممتاز ممتاز
          للآن شغال تمام معاك

          عندي استفسار وعدم وضوح في فهم Cutting DNA:restriction (modification) Enzymes

          and

          Cutting DNA type 11 Restriction Enzymes

          والف الف شكر وكل عام وانتي بخير
          الملفات المرفقة

          تعليق

          • #6
            ان شاء الله سيتم شرح ال Restriction Enzymes بالتفصيل

            بما ان هدف ال cloning هو انتاج عدد من قطعة معينة من ال DNA ولأن فقط قطعة صغيرة نستطيع زرعها في الناقل
            فبالتالي يجب قص قطعة ال DNA وزرعها في الناقل ونحتاج في هذه العملية لشيئين انزيمات قص واخرى للصق
            ال Restriction enzymes هي عبارة عن endonucleases تنتجها البكتيريا تستطيع تميز منطقة طولها ما بين
            4-8 bp تسمى منطقة القطع او القص وتعمل على قص سلسلتي ال DNA في هذه المنطقة وتكون في العادة
            هذه المنطقة Palindrom =تعني ان قرأنا ال DNA 5'-3' L أو العكس يكون نفس التسلسل مثال على ذلك من صورتك



            GAATTC السلسلة الاولى
            CTTAAG السلسلة التانية

            قراءة السلسلتين نفسها لكن بالعكس ... من الصورة ال EcoR1 يقطع هذا التسلسل بعد القاعدة الاولىG
            في السلسلة الاولى وبعد القاعدة نفسها من الطرف الثاني فيكون الناتج كما هو مبين في الصورة التالية



            في هذه الحالة نلاحظ ان النهايتين لل DNA مكملتين لبعضهما فيطلق عليهما اسم cohesive sticky ends
            طبعا sticky ends لانه يوجد طرفي لسلسلة ال DNA غير مرتبطتين

            *************************

            الصورة الثانية ال mdification



            بالاضافة الى Restriction enzyme تنتج البكتيريا mdification enzyme الهدف منه حماية ال DNA للبكتيريا نفسها
            عن طريق تعديله في موقع القطع .. بطريقة بسيطه وهي اضافة مجموعة ميثل لقاعدة او قاعدتين في منطقة القطع

            بوجود مجموعة الميثل تمنع االانزيمات من قطع المنطقة .. وهكذا مجموعات الميثل مع ال restriction endonucleases
            تشكل نظام لحماية الDNA الخاص بالبكتيريا من التحطم وهو يحطم ال DNA الغريب الداخل الى الخلية


            في الجزء الاول من الصورة كيف يتم تحطيم ال DNA الغريب للبكتيروفيج متلا والجزء الاسفل كيف تمت
            المحافظة على DNA البكتيريا بعملية اضافة مجموعة الميثل

            بالنسبة للسؤال الاخير سأجيبك عنه لاحقا عندي طلعة عيد
            وكل عام وانت بخير
            كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

            تعليق

            • #7
              واااااااااااااااااااااااااو
              برافو عليك والله , وانا انتظر والله
              وكل عيد وانت الخير له
              مرررة شكرا

              تعليق

              • #8
                العفو منك المهم ان تكون استفدت وان اردت الاستزادة ضع سؤالك ولا تقلق

                -------------------------------------------------------------------

                REsTrIcTiON EnZymEs

                هناك ثلاثة انواع من ال restriction enzymes النوع الاول منها معقد وهو يجمع ما بين ال restriction
                وال modificationولكن يقطع بشكل عشوائي وبعيد عن مكان التحديد فالقطع يحدث حوالي
                400-600 bpعن مكان التحديد واستعمال هذا النوع قليل

                النوع الثاني restriction enzymes II : يقطع هذا الانزيم في المكان المراد قطعه او بالقرب منه فينتج عنه
                قطع منفصله وتكون واضحة جدا على الجـِل ومن ميزات هذه الانزيمات : تميز موقع طوله 4-8 bp وهي
                كذلك تتميز بانها palindroms

                اهم انواع هذه الانزيمات ومصدرهاومكان القطع وشكل الناتج عن القطع مبين في الجدول التالي


                ماذا تعني sticky ends و blunt ends ؟
                ال sticky ends تعني ان يتم قص ال DNA بشكل متداخل مما يعطي نهاية حرة منه في منطقة القطع
                ال blunt تكون كل تكون النيوكليوتيدات في النهايات مرتبطة مع نيوكليوتيد مكمل لها كما في حالة Sma1

                النوع الثالث من هذه الانزيم يقطع خارج حدود المنطقة المراد قطعها بحوالي 25-27 bp
                كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

                تعليق

                • #9
                  راااااائع

                  يعطيكِ الف عافيه عزيزتي

                  انتي فخر لكل العرب

                  بُركت اعمالك وزاداك الله من علمه:sm199:
                  اللهم اني اعوذ بك ان اُشرك بك شيئاً اعلمه

                  واستغفرك فيما لا اعلمه

                  تعليق

                  • #10
                    عزيزتي أميرة لا تنسي انك قدوتنا


                    لك مني خالص الدعاء
                    كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

                    تعليق

                    • #11
                      متابع جدا ومهتم كثير
                      هل من طريقه لما انسخ الكلام الي فوق والصقه بالوورد ؟
                      لاني لما اسوي كذا مايطلع مرتّب ؟

                      الف مليون شكر

                      تعليق

                      • #12
                        تستطيع تحميله على وورد من هنا

                        http://www.arabslab.com/vb/uploaded/41766_r1.doc

                        والورد 2007 تم تخزينه 2003 لاني ما بعرف اذا ممكن تفتحه
                        كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

                        تعليق

                        • #13
                          اختي , الله ييسر أمرك ويكشف همك ويهديك ويوفقك بالدنيا والآخرة
                          الملف فتح وبنفس ماتمنيته وبنفس ماحاولت اسويه ولا قدرت
                          الف شكرا

                          تعليق

                          • #14
                            المشاركة الأصلية بواسطة advanced مشاهدة المشاركة
                            اختي , الله ييسر أمرك ويكشف همك ويهديك ويوفقك بالدنيا والآخرة
                            الملف فتح وبنفس ماتمنيته وبنفس ماحاولت اسويه ولا قدرت
                            الف شكرا
                            الحمد لله
                            كن حذرا وأنت تقرأ كتب الصحة، فقد تموت بخطأ مطبعي ( مارك توين)

                            تعليق

                            • #15
                              سلام ويعطيلك العافية

                              لدي سؤال
                              الحين restriction enzime 11 مميزاته
                              انه يتعرف على مكان متماثل ,Recognise symmetrical sequences in DNA
                              وانه palindromes مافهمت وش تعني بالضبط ؟

                              ايضا ايش يقصد لما يقول many enzymes with different sequence specification

                              وبالنسبة للنهايات يقول
                              cohesive
                              and
                              sticky ستكي عرفتيها لي انه بعد القص تكون النهاية حرة فما فهمت ايش يعني حرة

                              وكل الشكر

                              تعليق

                              السابق 1 2 template التالي
                              يعمل...
                              X