مضادات التخثر ( موانع التجلط ) Anticoagulants


‏تستخدم مضادات التخثر في حالة استعمال عينات من البلازما أو الدم الكلي حسب ما تقتضيه التجربة وعليه يجب إضافة مضاد للتخثر إلى أنبوبة جمع الدم حال سحبه مباشرة وعادة يغلق جدار أنبوبة جمع الدم بمضاد التخثر ، وتجدر الإشارة إلى أن اختيار مضاد التخثر يجب أن يقوم على اعتبار أن هذا المضاد لن يؤثر على التحليل الكيميائي وهذه النقطة مهمة جدا . لأن مصادر التخثر هي مركبات كيميائية لأملاح بعض المعادن مثل الصوديوم والبوتاسيوم والليثيوم ، ‏لذلك لا يمكن استخدام مضادات التخثر من أملاح الصوديوم والبوتاسيوم عندما يخص التحليل تعيين الإلكتروليتات كالصوديوم والبوتاسيوم لأن ذلك سوف يؤدي إلى خطأ إيجابي أكبر في نتائج التحليل ولكن في مثل هذه الحالة يمكن استخدام مضادات التخثر لليثيوم أو الأمونيوم .

‏أما في حالة تحليل الكالسيوم في الدم فلا يمكن استخدام أكزالات الصوديوم لأن هذا الملح سوف يزيل كل ما تحتويه العينة من الكالسيوم بترسيبه على شكل أكزالات الكالسيوم .

‏وكذلك تعمل مضادات التخثر على تثبيط فعالية بعض الإنزيمات ، مثل إنزيم الفوسفاتاز الحمضي Acid Phosphatase والفوسفاتاز القاعدي Alkaline Phosphatase ‏وأنزيم نازعة الهيدروجين من لاكتات LDH أما أملاح فلوريد البوتاسيوم أو الصوديوم فتثبط فعالية إنزيم اليورياز بينما تنشط فعالية إنزيم الأميلاز ، كما تستطيع مضادات التخثر إفقاد الاختبار أهميته المرضية

هذه بعض أنواع المواد المخثرة للدم .

1 – الهيبارين Heparin

‏هو مادة مضادة للتخثر وهو من مكونات الدم الأساسية ولكنه يوجد بتركيز لا يكفي لمنع تخثر الدم ، ويتولد الهيبارين من خلايا الكبد فهو موجود بتركيز عالي في الكبد كما أنه موجود أيضا في الخلايا الرئوية وقد أمكن فصله وعزله بشكل ملح متبلور من مستخلص الكبد والرئة ويتميز عن غيره بكونه لا يتداخل معه أي اختبار من اختبارات التحليل الكيميائي ، والهيبارين عبارة عن ميكوتين عديد حمض الكبريتيك Muccoitin Polysulphouric – Acid وهو من السكريات المتعددة ويمكن الحصول عليه تجاريا في الوقت الحاضر من أملاح الصوديوم Sodium Heparin أو ملح البوتاسيوم Potassium Heparin أو ملح الليثيوم Lithium Heparin

يعمل الهيبارين كمضاد للثرومبين Antithrombin حيث يمنع نقل أو تحويل البروثرومبين Prothrombin إلى ثرومبين Thrombin وهكذا يمنع تكوين الفيبرين Fibrin إلى الفيبرينوجين Fibrinogen وتتم عملية التجلط على مرحلتين كالتالي :


Prothrombin Thrombplastic Activity Factor ► Thrombin

Fibrinogen Thrombin ► Fibrin (blood colt)



‏ويحتاج الهيبارين إلى عامل مساعد Cofactor للقيام بعمله .

يضاف الهيبارين بنسبة 20% وحدة لكل ملليتر من الدم ، وبما أنه لا يذوب في الحال لذا فإن محلوله غالباً ما يستخدم ويجفف، علر جدران الأنبوبة ليكون في تماس مباشر مع الدم ومفعوله أفضل ما يمكن ، ولا تزال أسعاره المرتفعة ومفعوله المؤقت من معوقات استخدامه في المختبرات إذا ما قورن .بمضادات التخثر الأخرى ، ويحتوي هيبارين الصوديوم على ما لا يقل عن 110 وحدة / مجم ويستعمل عادة بتركيز حوالي 0.2 مجم / مل من الدم .

2 – اكزالات البوتاسيوم Potassium Oxalates

يعمل هذا ا‏لمضاد على ترسيب أيونات ا‏لكالسيوم وبذلك يمنع تجلط الدم ويفضل استعماله لسهولة ذوبانه ، ونحتاج عادة إلى 10 – 20 مجم من إكزالات ا‏لبوتاسيوم لمنع تجلط 10مل من ا‏لدم و 2 مجم لكل واحد مل من ا‏لدم ويستعمل هذا المحول عادة بتركيز 30% ويعاير إلى الرقم الهيدروجيني PH = 7.4 باضافة محلول هيدروكسيد البوتاسيوم أو محلول حمض الاكزاليك ومن الجدير بالذكر أن 0.1 مل من محلول إكزالات البوتاسيوم المحمر تكفي لمنع تخثر 10 مل من الدم.

3 - فلوريد الصوديوم Sodium Fluoride

يستعمل عادة كمادة حافظة من أجل تقدير الجلوكوز في الدم إلا أنه يستخدم كمضاد للتجلط (ضعيف ) ، ‏وعندما يستخدم كمادة حافظة بالإضافة إلى وجود مانع للتجلط مثل اكزالات البوتاسيوم فأنه يكون مؤثر بتركيز حوالي 2 مجم / 1 مل من الدم ويبدأ تأثيره عن طريق تثبيط النظام الانزيمي المشترك في عملية Glycolysis الذي يؤدي إلى قلة تركيزه ، وتحضر الأنابيب الحاوية لهذا لهذا المزيج بإذابة 4 ‏جم من كلوريد الصوديوم مع 12 جم من إكزالات البوتاسيوم في 200 ‏مل من الماء ، توضع قطرة واحدة في كل أنبوب لكل 1 مل من الدم وتجفف الأنابيب بدرجة حرارة أقل من 100 م .

وكقاعدة عامة فإذ الفلوريد يجب ألا يستخدم عندما يكون جمع العينات من أجل تقديرات إنزيمية أو عندما يستخدم ككاشف Reagent في الاختبار (الطول الإنزيمية) مثل طريقة اليورياز Urease لتقدير اليوريا .

4 – إيثلين ثنائي الأمين رباعي حمض الخل
Ethylene Diamine Tetra Acetic Acid (EDTA)

يفضل استخدام هذا المضاد في اختبارات علم الدم Hematology بصورة خاصة حيث يعمل على المحافظة على المكونات الخلوية من التلف ويستخدم عادة بشكل ملح ثنائي الصوديوم أو ثنائي البوتاسيوم بتركيز يقارب من 1 ‏- 2 مجم /

اذا هذا لم يكفي بلغني والسلام عليكم

1.1.1 Whole blood
A venous, arterial or capillary blood sample in which the concentrations and properties of cellular and
extra-cellular constituents remain relatively unaltered when compared with their in-vivo state.
Anticoagulation in-vitro stabilizes the constituents in a whole blood sample for a certain period of time.
1.1.2 Plasma
The virtually cell-free supernatant of blood containing anticoagulant obtained after centrifugation.
1.1.3 Serum
The undiluted, extracellular portion of blood after adequate coagulation is complete.
1.1.4 Anticoagulants
Additives that inhibit blood and/or plasma from clotting ensuring that the constituent to be measured is
non-significantly changed prior to the analytical process. Anticoagulation occurs by binding calcium
ions (EDTA, citrate) or by inhibiting thrombin activity (heparinates, hirudin). The following solid or
liquid anticoagulants are mixed with blood immediately after sample collection:
1.1.4.1. EDTA
Salt of ethylene diamine tetraacetic acid. Dipotassium (K2), tripotassium (K3) (41) and disodium (Na2)
salts are used (86); concentrations: 1.2 to 2.0 mg/mL blood (4.1 to 6.8 mmol/L blood) based on
anhydrous EDTA.
1.1.4.2. Citrate
Trisodium citrate with 0.100 to 0.136 mol/L citric acid. Buffered citrate with pH 5.5 to 5.6:
84 mmol/L tris odium citrate with 21 mmol/L citric acid. Differences were noticed between 3.2% and
3.8% (v/v) citrate when reporting results in INR (1, 145, 192, 210). WHO and NCCLS recommend
0.109 mol/L (3.2%) citric acid. The International Society for Thrombosis and Haemostasis (ISTH)
recommends the use of Hepes buffered citrate for all investigations of haemostastic functions (114).
a. A mixture of one part citrate with nine parts blood is recommended for coagulation tests
(86, 136).
b. One part citrate mixed with four parts blood is recommended to determine the erythrocyte
sedimentation rate (86).
WHO/DIL/LAB/99.1 Rev. 2
Page 6
1.1.4.3. Heparinates
12 to 30 IU/mL of unfractionated sodium, lithium or ammonium salt of heparin with a molecular mass
of 3 to 30 kD is recommended to obtain standardized heparinized plasma (86).
Calcium-titrated heparin at a concentration of 40 to 60 IU/mL blood (dry heparinisation) and 8 to 12
IU/mL blood (liquid heparinisation) is recommended for the determination of ionized calc ium (22).
1.1.4.4. Hirudin
Hirudin is an antithrombin extracted from leeches or prepared by a genetic engineering process.
Hirudin inhibits thrombin by forming a 1:1 hirudin-thrombin complex. Hirudin is used at a
concentration of 10 mg/L (40).
The colour codes of anticoagulants described in ISO/DIS 6710 are:
EDTA = lavender/red;
citrate 9 + 1 = light blue/green;
citrate 4 + 1 = black/mauve;
heparinate = green/orange;
no additives (for serum) = red/white (86).
1.2 Plasma or serum?
1.2.1 Advantages of using plasma
The following aspects support the preferential use of plasma versus serum in laboratory medicine:
Time saving: Plasma samples can be centrifuged directly after sample collection, unlike serum, in
which coagulation is completed after 30 minutes,
Higher yield: 15 to 20 % more in volume of plasma than of serum can be isolated from the same
volume of blood.
Prevention of coagulation-induced interferences: Coagulation in primary and secondary tubes that
were already centrifuged, may block suction needles of the analyzers when serum tubes are used;
this is prevented by using anticoagulants.
Prevention of coagulation-induced interferences: The coagulation process changes the concentrations
of numerous constituents of the extra-cellular fluid beyond their maximum allowable limit (70,
202). The changes are induced by the following mechanisms:
a. Increase in the concentrations of platelet components in serum as compared to plasma (e.g.
potassium, phosphate, magnesium, aspartate aminotransferase, lactate dehydrogenase,
serotonin, neurone-specific enolase, zinc). Release of amide-NH3 from fibrinogen induced by
action of clotting factor XIII.
b. Decrease in the concentration of constituents in serum as a result of cellular metabolism and
the coagulation process (glucose, total protein, platelets).
c. Activation of the cell lysis of erythrocytes and leukocytes in non-coagulated blood (cell-free
haemoglobin, cytokines, receptors).
Certain constituents should only be measured in plasma (e.g. neurone-specific enolase, serotonin,
ammonia) to obtain clinically relevant results.

جزاك الله خــــــــــــــــير وبالجد معلـــــــــــــــــــــــــومات مفــــــــــــــــــــــــيدة ومُوفق إنشــــــــــــاء الله