طريقة الاليزا (ELISA)

( Enzyme linked immunsorbent assay)


طريقة الاليزا :-

تستخدم هذه الطريقه بصورة كبيرة فى تحاليل المناعة والهرمونات وكذلك الفيروسات .

فكرة الاختبار:-
تعتمد فكرة هذه الطريقة على معلومة هامة فى علم المناعة وهى فكرة المناعة المتخصصة والتى تتلخص فى أنه عند دخول جسم غريب الى جسم الانسان (فيرس معين مثلا ) يقوم جهاز المناعة بتكوين أجسام مضادة مناعيه ضد انتيجينات هذا الجسم الغريب وتظل موجودة فى الجسم فيما يسمى الذاكرة المناعية , تكون هذه الاجسام المضادة خاصة للأنتيجين الذى تكونت من أجلة فقط ومن هنا تأتى الفكرة فعندما نريد أن نبحث عن انيجين أو فيرس معين فى عينة لشخص ما نأتى بالاجسام المضادة المتخصصة له فترتبط به والعكس صحيح .


شرح طرق القياس الكيميائى ( طريق الاليز ) وهما طريقتان:-


أولا الطريقه المباشرة (Direct Elisa ) :- احدى الطرق التى تستخدم لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة (اى الميكروب نفسه)

ثانيا الطريقه الغيرمباشرة(InDirect Elisa) :- وهى تحديد نسبة أجسام مضادة فى العينة . (مضادات الميكروب)



* طريقة الاليزا المباشرة Direct Elisa

فى الاليزا عادة نستخدم أطبافق الاليزا وهو طبق مكون من صفوف وكل صف مكون من 8 ويلات (نقرات) وعادة يكون الطبق 96 ويل.



فى الطريقة المباشرة نبحث عن أنتجين مجهول
2- تكون جدران الويلات مغطاة بالاجسام المضادة الخاصة بالانتيجين المراد الكشف عن وجودة
3- عند اضافة العينة الى الويل تقوم الاجسام المضادة الموجودة على جدران الويل بالارتباط بالانتيجن اذا وجد فى العينة
4- يتم غسيل الويل للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة والانتيجنات الاخرى الغريبة ويتبقى الانتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود على جدار الويل
(antibody antigen complex) يسمى الجسم المضادالمرتبط بالانتجين (معقد الانيجين والجسم المضاد




- يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل هذا الجسم المضاد الثانى مع معقد الانتيجين والجسم المضاد
- تكرر عملية الغسيل مرة أخرى للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة
- يتم اضاف الخطوة الاخيرة وهو مركب (substrate or tmb) يقوم الانزيم المرتبط فى الجسم المضاد الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لون .












بعد ذلك يتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى ( Stop solution )
يتم القراءة على جهاز قراءة الاليزا عند الطول الموجى المناسب


تتناسب قوة امتصاص هذا اللون مع تركيز الانيجين المجهول فى العينة
ويأتى مع كل كيت اليزا عدة استاندرات - محاليل قياسيه (6 غالبا) بتركيزات متدرجة معلومة يتم عمله مع الاختبار المطلوب ثم يتم رسم منحنى قياسى يمثل العلاقة بين قوة التركيز concentration الامتصاص absorbance
ويتم حساب النتائج من هذا المنحنى .


* طريقة الاليزاغير المباشرة In Direct Elisa

نفس خطوات الاليزا المباشرة ولكن فى هذه الطريق نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة فتكون العكس جدران الويلت مغطاة بالانتيجنات الخاصة بالاجسام المضادة المراد الكشف عنها وباقى الخطوات هى نفسها ولعل اشهر الامثلة لهذا النوع الاليزا الخاصة بالكشف عن الاجسام المضادة بفيروس (C الكبدى).



أنواع الاختبارات لفحص الايدز

ان أكثر اختبارات الأجسام المضادة شيوعا هو اختبار ELISA و اختبار Rapid test، أما اختبار Western Blot أقدر على تشخيص حالة عدم الإصابة بالفيروس من غيره من الاختبارات إلا انه أيضا أكثر كلفة. في مصر تستخدم المعامل المركزية اختبارات ELISA كاختبارات أولية ثم اختبار Western Blot لتأكيد النتائج .

اختبارات الأجسام المضادة:
هذا النوع من الاختبارات يكشف عن الأجسام المضادة مثلا لفيروس مثل المسبب لنقص المناعة البشر يه الايدز و لا يكشف عن وجود الفيروس نفسه، فعندما يغزو فيروس (الإيدز) المسبب نقص المناعة البشرى الجسم يدخل في خلايا CD4 اللمفاوية و هي إحدى فئات كرات الدم البيضاء، فيرد جهاز المناعة على هذا الغزو بإنتاج الأجسام المضادة لمحاربة العدوى ، و تعتمد اختبارات الأجسام المضادة على الكشف عن وجود هذه الأجسام كدليل على وجود الفيرس.

طريقة الاليزا (ELISA)

( Enzyme linked immunsorbent assay)


طريقة الاليزا :-

تستخدم هذه الطريقه بصورة كبيرة فى تحاليل المناعة والهرمونات وكذلك الفيروسات .

فكرة الاختبار:-
تعتمد فكرة هذه الطريقة على معلومة هامة فى علم المناعة وهى فكرة المناعة المتخصصة والتى تتلخص فى أنه عند دخول جسم غريب الى جسم الانسان (فيرس معين مثلا ) يقوم جهاز المناعة بتكوين أجسام مضادة مناعيه ضد انتيجينات هذا الجسم الغريب وتظل موجودة فى الجسم فيما يسمى الذاكرة المناعية , تكون هذه الاجسام المضادة خاصة للأنتيجين الذى تكونت من أجلة فقط ومن هنا تأتى الفكرة فعندما نريد أن نبحث عن انيجين أو فيرس معين فى عينة لشخص ما نأتى بالاجسام المضادة المتخصصة له فترتبط به والعكس صحيح .


شرح طرق القياس الكيميائى ( طريق الاليز ) وهما طريقتان:-


أولا الطريقه المباشرة (Direct Elisa ) :- احدى الطرق التى تستخدم لتحديد نسبة انتيجين مجهول فى العينة (اى الميكروب نفسه)

ثانيا الطريقه الغيرمباشرة(InDirect Elisa) :- وهى تحديد نسبة أجسام مضادة فى العينة . (مضادات الميكروب)



* طريقة الاليزا المباشرة Direct Elisa

فى الاليزا عادة نستخدم أطبافق الاليزا وهو طبق مكون من صفوف وكل صف مكون من 8 ويلات (نقرات) وعادة يكون الطبق 96 ويل.



فى الطريقة المباشرة نبحث عن أنتجين مجهول
2- تكون جدران الويلات مغطاة بالاجسام المضادة الخاصة بالانتيجين المراد الكشف عن وجودة
3- عند اضافة العينة الى الويل تقوم الاجسام المضادة الموجودة على جدران الويل بالارتباط بالانتيجن اذا وجد فى العينة
4- يتم غسيل الويل للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة والانتيجنات الاخرى الغريبة ويتبقى الانتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود على جدار الويل
(antibody antigen complex) يسمى الجسم المضادالمرتبط بالانتجين (معقد الانيجين والجسم المضاد




- يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل هذا الجسم المضاد الثانى مع معقد الانتيجين والجسم المضاد
- تكرر عملية الغسيل مرة أخرى للتخلص من الاجسام المضادة غير المرتبطة
- يتم اضاف الخطوة الاخيرة وهو مركب (substrate or tmb) يقوم الانزيم المرتبط فى الجسم المضاد الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لون .












بعد ذلك يتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى ( Stop solution )
يتم القراءة على جهاز قراءة الاليزا عند الطول الموجى المناسب


تتناسب قوة امتصاص هذا اللون مع تركيز الانيجين المجهول فى العينة
ويأتى مع كل كيت اليزا عدة استاندرات - محاليل قياسيه (6 غالبا) بتركيزات متدرجة معلومة يتم عمله مع الاختبار المطلوب ثم يتم رسم منحنى قياسى يمثل العلاقة بين قوة التركيز concentration الامتصاص absorbance
ويتم حساب النتائج من هذا المنحنى .


* طريقة الاليزاغير المباشرة In Direct Elisa

نفس خطوات الاليزا المباشرة ولكن فى هذه الطريق نبحث عن الاجسام المضادة المجهولة فى العينة فتكون العكس جدران الويلت مغطاة بالانتيجنات الخاصة بالاجسام المضادة المراد الكشف عنها وباقى الخطوات هى نفسها ولعل اشهر الامثلة لهذا النوع الاليزا الخاصة بالكشف عن الاجسام المضادة بفيروس (C الكبدى).



أنواع الاختبارات لفحص الايدز

ان أكثر اختبارات الأجسام المضادة شيوعا هو اختبار ELISA و اختبار Rapid test، أما اختبار Western Blot أقدر على تشخيص حالة عدم الإصابة بالفيروس من غيره من الاختبارات إلا انه أيضا أكثر كلفة. في مصر تستخدم المعامل المركزية اختبارات ELISA كاختبارات أولية ثم اختبار Western Blot لتأكيد النتائج .

اختبارات الأجسام المضادة:
هذا النوع من الاختبارات يكشف عن الأجسام المضادة مثلا لفيروس مثل المسبب لنقص المناعة البشر يه الايدز و لا يكشف عن وجود الفيروس نفسه، فعندما يغزو فيروس (الإيدز) المسبب نقص المناعة البشرى الجسم يدخل في خلايا CD4 اللمفاوية و هي إحدى فئات كرات الدم البيضاء، فيرد جهاز المناعة على هذا الغزو بإنتاج الأجسام المضادة لمحاربة العدوى ، و تعتمد اختبارات الأجسام المضادة على الكشف عن وجود هذه الأجسام كدليل على وجود الفيرس.

جهاز قياس الألوان

Spectrophotometers

هو جهاز كهربائى يقيس مدى تأثر الضوء عند مرورة من خلال المحاليل الملون المختلفة ويعمل بنظامين

الأول :- قياس الضوء الممتص بواسطة المحلول الملون

الثانى :- قياس كمية الضوء المار من المحاليل الملونة

وهذا الجهاز من المكونات الأساسية بمعامل الكيمياء الحيوية والاكلينيكية التى تهتم بالقياسات الكميائية لسوائل الجسم المختلفة مثل قياس السكر بالدم /عمل قياس لكفائة الكلى والكبد /المعادن...وغيرها

ويعمل بوضع المحلول الملون بعد تمام التفاعلات والخطوات الخاص بالاختبار فى أنبوب خاص بالجهاز يسمى (Cuvet) يوضع ليعترض طريق الشعاع المار لكى يتأثر ويحدث قرأة على عداد أو مؤشر الجهاز. وتكون هذه العملية مسبوقة بضبط الجهاز عند طول موجى محدد للضوء المار (Wavelength) و صفر القراءة للجهاز على محلول يسمى البلانك (blank) لكل نوعية إختبار على حدى .



رقم (1) يشير الى مكان وضع العينة

رقم (2) يشير الى لوحة المفاتيح والتحكم

رقم (3) يشير الى شاشة القراءة



صورة توضح بعض انابيب كيوفيت(Cuvet) المستخدمة للقراءة على الجهاز الخاص بقياس الالوان . وهى انابيب مجوفه ذات أربع أوجه على شكل متوازى مستطيلات شفافة بدرجه عالية مصنوعه من الزجاج أو البلاستيك الفيبر النقى
تركيب أجهزة القياس الضوئى

1 - مصدر الضوء ( لمبات تنجستين مصدر للضوء العدى) - ( لمبة هيدروجينية مصدر للأشعة فوق البنفسجية )

2 - مرشحات ضوئية

3 - منتقى موجة واحدة Monochromaton

4 - منشور زجاجى أو عاكس مشتت للضوء

5 - مكبر ضوئى Photomultiplier

6 - خلية الأمتصاص (الكيوفيت) Cuvette

7 - خلية ضوئية photo celle

8 - نظام القراءة ( يوجد طريقتان )

أ - القراءة على تدريج ومؤشر الجهاز - وفى هذا النوع يوجد تدريجان انظام القراءة أحدهما يقراء النفاذية(Transmision) و الآخر للأمتصاص(Absorbance) و العلاقة عكسية بينهما

ب - القراءة الرقمية Digital Reading- وتكون على عداد رقمى يتم ضبطه مسبقا من خلال لوحة التحكم بالجهاز لتحديد نظام القراءة .

قوانين أمتصاص الضوء :-

أولا قانون لمبرت Lambert:- كمية الضوء الممتص يعتمد علىسمك المحلول الملون أو مسار الضوء خلال المحلول

ثانيا قانون بير Beer :- كمية الضوء الممتص تعتمد على لون المحلول.

وبدمج القانونين معا - و فى هذه الطريقة لابد من وجود( محلول قياسى) Standard Solution

CT
=
RT

Cs
Rs

100
=
Cs
=
RT
=
CT

v
Rs


حيث أن :- CT = concentration---- test

RT = Reeding--------- test

Rs = Reeding ---- standard

V = vol ----Blood- serum -plasm

يستعمل لضبط جهاز قياس الألوان محلول البلانك (Blank) وهذا المحلول يحتوى على كل المواد الداخلة فى التفاعل عدا المادة المراد قياسها - كما يمكن أن يستخدم الماء المقطر كمحلول بلانك فى بعض الأحيان

س :- ما هى للأحتياطات الواجب مراعاتها عند إستخدام جهاز القياس الطيفى (الضوئى) ؟

1 - يجب تحديد طول الموجة(Wavelength) المخصص للقراءة

2 - ضرورة ضبط(Zero) الجهاز على محلول البلانك (Blank)

3 - مراعاة نظافة الكيوفيت Cuvette ووضعها فى الجهاز بصورة صحيحة (بحيث يكون السهم الموجود على حافة الكيوفيت العلوية فى مقايل وجة مستخدم الجهاز)

4 - مراعات أن لا يقل المحلول فى الكيوفيت عن الحد الألدنى للقراءة (1 مللتر) وعدم وجود أى فقعات بها

5 - غلق مكان وضع الكيوفيت Cuvette عند القراة

6 - عمل قياسات جودة من آن لآخر Quality Control على الأجهزة والأدوات المستخدمة فى المعامل 0

:sm199:

The Bence Jones protein طريقة عمل هذا الاختبار ضروري بالخطوات

شكرررررررررررررررررررررررررررررررررررررررررررررا

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته اتكمنى لكم كل الصحه والعافيه هذه اول مشاركه لي في مختبرات العرب رغم انتسابي لها منذ فتر طويله اسمحو ان احيي القائمين عليه واحيي جميع احضور والمنتسبين واعرفكم على نفسي انا عمر هادي بكلوريوس مختبرات طبيه جامعة صنعاء اليمن خريج عام 2001 شكرا والى اللقاء

اخوي علي السيد اتبع الرابط وان شاء الله تكله الي تريدة وحي الله اهل هيت

http://www.arabslab.com/vb/showthread.php?t=14868

السلام عليكم اريد منكم اي ملف عن طريقة عمل جهاز ال (mini vidas ) او اي تعليمات عنه وكيف ادخل الماستر لوت منول في الجهاز

الموضوع مضحك نوعا ما مع احترامي وتقديري للجميع

مساء النور سكره بعض المعلومات قد تفيدك جهاز الهرمونات الحديث يسمى techan يسع 99 عينه تسمى patch يحتوى على خمس او ست stander نقوم بقرائتها لعمل curve ومن هذا الcurve يقرأ الجهاز العينات زاتيا بعد البرمجه له
ثانيا جهاز الكيمياء الذى ذكرتيه يسمى spectrophotomter نقوم فيه بقراءة ال std لكل kit ومن ثم نحفظها فى موقع معين بالارقام فى الجهاز وعند القيام بالفحص ماعليكى سوى كتابة رقم الفحص المحفوظ فى الجهاز وادخال العينه حيث يقوم الجهاز بقرائتها وتحليلها ويعطيها لكى مباشرة . اتمنى لكى التقدم والمعرفه والسلام عليكم

الاخوه الكرام الف تحيه :أجهزة المختبر الكيميائيه الحديثه تسمى automation وهذه الاجهزه فى الغالب الاعم تضم مايلى : جهاز تحليل الدم الكامل ويسمى haematology analyzer والاسم التجارى له sysmex هذا الجهاز يحتوى على فلاتر تقسم لك خلايا الدم كل على حدا مثل الحمضيات والقلويات والخلايا الجذعيه والصفائح الدمويه وما شابه ذلك ،عيب هذا الجهاز لا يعطى ال comment النهائى للعينه من حيث نوع الانيميا او المرض المقصود . مما يضطرك الى صبغ العينه وقرائتها عيانيا بالمجهر .
ثانيا الجهاز الآخر المتداول فى المعامل الحديثه والمتخصصه يسمى جهاز spectrophotometer ويعتبر من اهم الاجهزه فى المعامل الكيميائيه وذلك للاتى :يحتوى على ثيرموميتر داخلى ممكا يغنيك من الwater bath ويعتمد فى قرائته على الامتصاص مثل الكلوروميتر بالاضافه للتركيز concentration الموجود فى العينه ويسمح لك ببرمجته وقراءة النتيجه مباشرة من الشاشه او الطابعه الاسم التجارى له biosystem . لا اطيل عليكم للحديث بقيه .سلام

الله يعطيكم الف عافية

جزاكم الله خيرا

السلام عليكم
جهاز الهرمونات يدعى azymلا ادري ان كنت قد كتبت الspellingصح ام لا
اما جهاز الكيماء فاسمةhitashy وهناك سلاسل كثيره
ارجو ان اكون قد افدتك