إعـــــــلان

تقليص
لا يوجد إعلان حتى الآن.

قراءة تسلسل المادة الوراثية ( نظريا)

تقليص
هذا موضوع مثبت
X
X
 
  • تصفية - فلترة
  • الوقت
  • عرض
إلغاء تحديد الكل
مشاركات جديدة

  • قراءة تسلسل المادة الوراثية ( نظريا)

    بسم الله الرحمن الرحيم


    أولا قبل لا نبدأ الموضوع حاب اقولكم خلفية علمية مكتشف هذه الطريقة عالم بيرطاني يدعى سانجر

    وتسمي chain termination method طريقة قطع السلسلة ، و مبدأها العلمي بسيط جدا و لكي نفهم المبدا ركزوا في التالي :

    اللبنات الأساسية لبناء المتسلسلة الوراثية Sequence عبارة عن

    A
    C
    G
    T

    و لنأخذ نظرة عن التركيب الجزيئي لهذه القواعد

    في الحالة الطبيعية DnTPS تدعم عملية التوصيل elongation
    و لكن في الحالة الثانية بعد نزع ذرة الأوكسجين في DDnTPS فأنها لا تدعم التوصيل ببعض و يحصل ايقاف لتركيبة السلسلة . طيب حط في الحسبان

    فلو استخدمنا تفاعل PCR بالظروف التالية

    A C T عبارة عن DnTPS و لكن اضفنا معها G على أنها DDnTP لا تدعم الارتباط أي لن يرتبط بعدها اي قاعدة و ستوقف التفاعل على التمبلت او خيط DNA الموجود

    التجربة :

    المواد :
    منتج PCR قد سبط عزله بطول معين 100 او 300 او 1000 قاعدة متسلسلة bp
    TaqPol انزيم البلمرة
    بفرز او محاليل منظمة للتفاعل
    قواعد سليمة من ACT
    قاعدة منقوصة من G
    برايمر أو بادئة خاصة بالمنتج
    نعمل الماستر مكس و نحطها في جهاز الدوران الحراري Thermal Cycler

    سيظهر لدينا منتج بأطوال متباينة يتوقف عند كل قاعد G
    كما في الصورة


    سؤال لو عملنا فصل كهربي على الجل أيها سيعبر اسرع ؟

    الأقل وزنا أي الأقرب في السلسلة

    اذن لو قمنا بأربع تفاعلات في كل تفاعل نغير قاعدة ، سنتج لنا منتجات PCR مفصوله بأصول معينة و منها نملأ الفراغ




    هذا للطريقة التقليدية

    و اما بالنسبة للطريقة الآليه مثل جهاز ABI prism

    فيتم دمج الأصباغ مع بعضها و كل مكان يتوقف فورا عند ارتباط قاعدة DDnTPS و لأن المخلوط أساسا
    مكون من DnTPS و أيضا DDnTPS فأيها يرتبط يستمر و يتوقف التفاعل








    و أي سؤال أنا حاظر

  • #2
    مجهود أكثر من رائع
    شكرا لك mohdsos

    تعليق


    • #3
      شكرا أخي الكريم على الطرح الرائع ...

      My Q is

      what is the program in the thermocycler , is it different from the PCR reaction "priemer" tempretur?

      تعليق


      • #4
        لا

        لا يختلف عن الPCR إلا في بعض التوقيتات لكن درجات الحرارة للبرايمر نفسها في PCR الأساس

        تعليق


        • #5
          thank you so much

          i have anthor Q

          can you mention what is the component of Big Dye that uesed in the sequence reaction ?

          تعليق


          • #6
            bigdye is trading mark for applied biosystems company containing
            all the DDNTPS
            and DNTPS
            and TaqPOL

            تعليق


            • #7
              thanks again

              but still I want to ask you ... just to make it clear for the readers

              Is this "big dye" sensetive for something ?

              تعليق


              • #8
                yes
                temp
                it should be stored in -30c
                and to use it over ice

                تعليق


                • #9
                  معلومات جميله جدا

                  جزاك الله خير

                  تعليق


                  • #10
                    شكرا على المقال المتميز

                    تعليق


                    • #11
                      المشاركة الأصلية بواسطة Rana.shk مشاهدة المشاركة
                      معلومات جميله جدا

                      جزاك الله خير
                      المشاركة الأصلية بواسطة trqziz مشاهدة المشاركة
                      شكرا على المقال المتميز

                      عفوا


                      اتمنى الفائدة للجميع

                      تعليق


                      • #12
                        مشكور يا دكتور

                        تعليق


                        • #13
                          معلومات جميييييييلة جدا
                          الله يعطيك العافية
                          samsama:more2:

                          تعليق


                          • #14
                            بارك الله فيك على هذا الموضوع الشيق
                            سؤال /ماالمقصود بال multiplex PCR وما المقصود STR

                            تعليق


                            • #15
                              كم اثار فضولى هذا العلم مشكور جزيل الشكر
                              تقبل مرورى
                              http://upload.wikimedia.org/wikipedi.../76/Mendel.png
                              يمضى الزمان ويذكر التاريخ أفضل الاعمال

                              تعليق

                              يعمل...
                              X