تويت
]دراسة حول التأثيرات السمية الخلوية والسميه الوراثية لعقار Sustanon"100" في الخلايا ا
قمت بهذه الدراسة عسى ان تنال اعجابكم
التأثيرات السمية الخلوية والسميه الوراثية لعقار Sustanon"100" في الخلايا الجنسية الذكرية للفأر المختبري Mus musculus
الخلاصة :
تهدف هذه الدراسة الى الكشف عن التأثير السمي الخلوي والوراثي لعقار Sustanon "100" في الخلايا الجنسية الذكرية للفأر المختبري Mus musculus . اذ اخذت ثلاث جرع ( 0.04 ,0.02 , 0.01 ) ملغم / كغم من وزن الجسم من عقار Sustanon "100" . تم الفحص من خلال ( 5 ) اختبارات وهي معامل الانقسام والتجمع المركزي للكروموسومات وتشكيل النوى الصغيرة , واختبار التشوهات الكروموسومية للخلايا الجنسية وكذلك التشوهات في رؤوس النطف . تبين من النتائج ان هذا العقار له تأثير معنوي في زيادة عدد الخلايا الجنسية وتشكيل النواة الصغيرة وزيادة التجمع المركزي للكروموسومات وزيادة معدل التغيرات الكروموسومية ممثلة بـ( الكسر الكروموسومي والكروماتيدي والقطع الكروموسومية والكروموسوم الحلقي ) , وكذلك زيادة في استحثاث التشوهات في رؤوس النطف مقارنة بمعدل العينة القياسية خاصة بعد 21 , 35 يوم من حقن الدواء . لهذه التأثيرات الجانبية التي تظهر مبكراً خلال فترة المعالجة , يجب ان تتوقف المعالجة او يجب ان يستبدل العقار بعد الاستشارة الطبية .
المقدمة :
يوجد العديد من المواد الكيمياوية كالادوية والمنشطات او المنظمات التي يتناولها الانسان في الحالات العلاجية والوقائية بعضها يشكل خطراً على صحته وبعضها له تأثيرات جانبية على الوظائف الحيوية عند تناولها بأستمرار حتى عند التراكيز الضئيلة منها , ومن هذه المواد العقار Sustanon " 100" الذي يستخدم كمنشط للخلايا الجنسية للانسان والذي يعتبر من مركبات التستسرون Testosteron(T) وهو من Gonalal steroid يفرز طبيعيا في الخصى والمبايض وغدة الكظر وافرازه يخضع لسيطرة الغدة النخامية Pituitary gland وعوامل مختلفة من النخامي والتوتة (1).
تلعب هذه الهرمونات دوراً في السلوك الجنسي للحيوانات وفي عملية تكوين ونضج النطف .
إن Follicle Stimulating Hormone (FSH) يرتبط بخلايا سيرتولي Sertoli وعملية ابتداء بروتين Androgen Binding Protein (ABP)
وهو من البروتينات السكرية التي ترتبط مع Testosteron والتي تؤثر على التمايز الجنسي وبناء النطف وتطور التراكيب الثانوية الجنسية ولها تأثير على نمط السلوك الذكري (2) .
أجريت العديد من الدراسات لمعرفة التأثيرات الجانبية لبعض العقاقير الطبية فعلى سبيل المثال لا الحصر : لوحظ تقدم في انقسام الخلايا وزيادة حدوث التبادل الكروماتيدي الشقيق Sister Chromatid Exchange لخلايا نقي العظم في الفئران المعرضة الى Hycanthone, Praziaquantel المستخدمة في علاج مرضى البلهارزيا (3) , كما لوحظ زيادة تشكيل النوى الصغيرة لخلايا نقي العظم للفئران المحقونة بالعقار Mitomycin-C-MMC
الذي يعمل على زيادة حدوث Cross-Linking بين اشرطة الـDNA وبالتالي التأثير في عملية الأنقسام واحداث تغيرات كروموسومية(4) , كما ويؤدي العقارين 6-thioguanine (6-TG) و Methotrexate (MTX) المستخدمان بشكل واسع في علاج سرطان المثانة في الأنسان الى تثبيط مستوى الانقسامات في الخلايا اللمفاوية في الانسان ولكن في نفس الوقت لها تأثيران جانبية في زيادة التغيرات الكروموسومية (5) .
صنعت الكثير من هذه المواد كمنشطات غير المشخصة من حيث قدرتها أو قابليتها وتأثيرها الجانبي على المادة الوراثية . أن الدراسات في هذا الجانب ضئيلة في العراق ونتيجة للظروف التي يمر بها ازداد استخدام وتواجد مثل هذه المواد خارج سيطرة الدوائر الصحية. وللحد من استمرار استخدامها وجدت هذه الدراسة.
المواد وطرائق العمل:
استخدمت ذكور فئران مختبرية بيضاء Mus musculus ضرب Balb/C , تم الحصول عليها من البيت الحيواني / كلية العلوم / جامعة بغداد , بعمر 8-12 اسبوع , وبمعدل
وزن 25 غم .
استخدمت في التجربة (33) فأراً ذكرياً قسمت الى خمسة مجاميع :
المجموعه الاولى ( 3 فئران ) حقنــــت بالمـــــاء المقطـــر استعملــــت كسيطــــرة سالبــــة .
المجموعة الثانية ( 3فئران ) حقنت بـ0.002 ملغم / كغم من MMC استعملت كسيطرة موجبة في حين قسمت (27) الباقية إلى ثلاثة مجاميع كل مجموعة ضمت ( 9 فئران ) حقنت تحت الغشاء البريتوني
Interperitoinal بمحلول Sustanon "100" اخذت من امبولات 1 مل تحتوي على محلول مؤلف من:
Testosterone propionate 20 mg
Testosterone phenylpropionate 40 mg
Testosterone isocaproate 40 mg
من إنتاج شركة Holland
المجموعة الثالثة ( 9 فئران ) حقنت Injection تحت غشاء البريتون بـ 0.01 ملغم / كغم من وزن الجسم من مادة Sustanon لثلاث جرع خلال فترة التجربة في اليوم 1 و 14 و 28 من بدء التجربة .
المجموعة الرابعة ( 9 فئران ) حقنت بـ 0.02 ملغم / كغم من وزن الجسم من مادة Sustanon ولثلاث جرع ايضاً وللايام 1 و 14 و 28 خلال فترة التجربة .
المجموعة الخامسة ( 9 فئران ) حقنت بـ 0.04 ملغم / كغم من وزن الجسم من مادة Sustanon ولثلاث جرع اعطيت في اليوم 1 و 14 و 28 خلال فترة التجربة .
حقنت جميع الحيوانات بـ 0.2 ملم ³ من محلول الكولجيسين قبل ثلاث ساعات من التشريح للحصول على كروموسومات الخلايا المولدة للنطف ( الخلايا الجنسية ) فقد جرى الحصول عليها حسب طريقة Ohno (6) مع اجراء بعض التحويرات , حيث جرى استئصال الخصية من الحيوان , يزال غلافها وتوضع الانابيب الناقلة للنطف في محلول سترات الصوديوم الثلاثية بتركيز 1% و لمدة 20 دقيقة تحت درجة حرارة الغرفة وعمل طرد مركزي بسرعة 1500 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق , وتم التخلص من الجزء العالق وأضيف 5 مل من محلول ناقص التوتر وتركت في الحاضنة تحت 37مº لمدة ساعة يرج خلال هذه الساعة عدة مرات , بعد ذلك عمل طرد مركزي وبسرعة 1500 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق والتخلص من الجزء العالق وأضيف له 5 مل من المثبت الى الجزء الراسب في البداية قطرتين على الجدران الداخلية
للانبوبة والرج المستمر حتى مزج المحلول بصورة جيدة . توضع في الثلاجة 4مº لمدة نصف ساعة . حضرت الشرائح وتركت لتجف في مكان نظيف تحت درجة حرارة الغرفة.
في حين جرى حساب تشكيل النواة الصغيرة حسب طريقة ( Schmid ) (7) مع اجراء بعض التحويرات عليها حيث تم حساب النسبة المئوية لتشكيل النوى الصغيرة في 100 خلية , اما التجمع المركزي للكروموسومات فقد جرى حساب النسبة المئوية للخلايا المتجمعة في 100 خلية . ولغرض حساب مؤشر انقسام الخلايا الجنسية فقد استخدمت معادلة
Stick و (8) San, اما لحساب النسبة المئوية للتغيرات الكروموسومية فقد اعتمدت طريقة
(9) Zhu , Au في 100 خلية في الطور الاستوائي وبصورة عشوائية , ولغرض استخراج حالات التشوهات في رؤوس النطف بعد تحضيرها بواقع 100 نطفة ضمن كل شريحة .
لقد اعتمد النظام الاحصائي S.P.S.S على وفق النموذج الاحصائي لتحليل التباين بأتجاه واحد Anovo بينما قورنت المعدلات المختلفة بأستخدام طريقة اقل فرق معنوي LSD وعلى مستوى 5% (10) .
النتائج والمناقشة:
1. مؤشر انقسام الخلايا الجنسية Mitotic index (MI)
يتضح من جدول (1) حصول تثبيط في معدل انقسام الخلايا الجنسية لفئران السيطرة الموجبة المعاملة بعقار MMC مقارنة بالسيطرة السالبة , وقد اكد التحليل التباين وجود فرق معنوي بينهما عند مستوى P<0.01 إن المايتومايسين – سي معروف كمضاد للاورام بسبب كونه يعمل Cross-linking لاشرطة الـ DNA ويثبط تضاعفه وبالتالي يؤدي الى انخفاض انقسام الخلايا (11). في حين يلاحظ ارتفاع النسبة المئوية لمعامل الانقسام للفئران المعاملة بالعقارSustanon وابتداءاً من الجرعة (0.01) ملغم / كغم لتصبح ( 15.33%) بعد الاسبوع حيث اعطت فرقاً معنوياً P<0.05 مقارنة بالسيطرة الموجبة لكن هذا لم يشكل فرقاً معنوياً عند المقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة ( 14.66%)
واستر هذا الارتفاع في معامل الانقسام بعد الاسبوع الثالث والخامس حيث كان (17.59 و 18.68 ) على التوالي وكان ارتفاع معامل الانقسام لباقي التراكيز المستخدمة (0.02, 0.04) ملغم / كغم بعـــــد ثلاثـــــة وخمســـــة اسابيــع مــــــن
المعاملــــــة والاحتماليــــــة (P<0.01) لجميــــــــع الايـــــــــــام .
ان سبب ذلك يرجع الى احتواء عقار Sustanon على مركبات هرمون الشحوم الخصوي Testosteron وهذه تلعب دوراً فعالاً في تنشيط عمليات الانقسامات الخلوية . ان هــــذه المواد قــــد تعمـــــــل علــــى حـــــــث أنزيمات بلمرة الـDNA
(DNA Polymerases ) (12) الضروري لتضاعف المادة الوراثية وتحفيزها على الانقسام , أو ان هــــذه الهرمونـــــات تؤثـــــر ايجابيــــاً علـــــى انزيمــات بلمــــرة
RNA Polymerases (13) ,والتــــــي تؤثــــر علــــى بروتينــــات النمــــــو ( قوى النمو ) Growth factorsحيث إن عملية الانقسام تتطلب العديد من المتطلبات لكي يحصل انقسام النواة Karyokinesis ومــــن ثــــم انقســـــام الســـــايتوبلازم Cytokinesis (14 , 15) .
2. تشكيل النواة الصغيرة Micronuclei (MN)
يبين جدول (1) المعدل والخطأ القياسي لتشكيل النوى الصغيرة لكلاً من الفئران غير المعاملة ( السيطرة السالبة ) والفئران المعاملة بالعقارMMC ( السيطرة الموجبة ) والفئران المعاملة بالعقار المنشط لتكوين النطف Sustanon "100" . حيث يتضح حصول زيادة في معدل التشكيل النوى الصغيرة وأختلفت السيطرة السالبة على السيطرة الموجبة اختلافاً معنوياً عالياً (P<0.001) حيث ان المايتومايسين سي والذي يستخدم لمعالجة بعض حالات السرطان هو عامل قاعدي يتطلب تحول ايضي ليصبح فعال بايولوجياً ويمتلك عدة اشكال تايضية وهي:
Cishydroxy ,2.7 Diminomitosense 1-phosphate analogous وTrans 1-hydroxy.
جميع هذه الأشكال التأيضية ترتبط بــ DNA اللبائن من خلال الارتباط التساهمي مع مجموعة الـــ N2 الخاصة بقاعدة الكوانين (4,7,15) أما تأثيراته على خلايا اللبائن فأنه يؤثر على أشرطة الـــ DNA من خلال تكوين اتحادات مع هذه الاشرطة حيث يعمل على اعاقة تلك الاشرطة اثناء التضاعف مؤدياً الى حدوث تغيرات كروموسومية وبمعدلات عالية .
لقد أشارت نتائج تحليل التباين الى وجود تأثير معنوي بمستوى (P<0.05) بين كل من التركيز وفترة المعاملة والتداخل فيما بينهما لهذه الظاهرة , كما يلاحظ زيادة معدل تشكيل النوى الصغيرة بزيادة الجرعة مقارنة بالسيطرة السالبة , اي أن تأثير العقار يعتمد على الجرعة المستخدمة.
أن تشكيل النوى الصغيرة ربما ناتجة عن حالات غير الطبيعية في انقسام القطع المركزية Centromeres لكروموسومات أو ناتجة بسبب أضرار في الــDNA تقود الى عدم فعالية القطع المركزية والى عدم تشكيل خيوط المغزل (16,17) وبالتالي تؤدي الى ظهور قطع كروموسومية خالية من القطع المركزية لديها القدرة على التحام نهاياتها لتكوين تشكيلات كروية تشبه النواة بحجم صغير جداً وهنا قد تظهر نتيجة لزيادة الفعالية العالية وغير المسيطر عليها لمادة Sustanon .
3. التجمع المركزي لكروموسومات Chromosomal Central Associated
يلاحظ من الجدول (1) ان التجميع المركزي لكروموسومات الخلايا الجنسية ونتيجة المعاملة بتراكيز Sustanon قد ازداد معنوياً (P<0.05) بالمقارنة مع الفئران المحقونة بالمايتومايسين – سي لوحده , و ان قيمة التجميع المركزي لكروموسومات السيطرة السالبة كانت (0.05%) , و السيطرة الموجبة (3.17%)
والاحتمالية بينهما كانت (P<0.01) .
أما بالنسبة للفئران المحقومة بالعقار فيلاحظ زيادة هذه الظاهرة بزيادة الجرعة خاصة بعد الأسبوع الثالث والخامس ولجميع التراكيز المستخدمة .
أن ظاهرة تجميع الكروموسومات في السايتوبلازم بشكل عناقيد أو مجاميع أثناء عملية سحب الكروموسومات الى قطبي الخلية في بداية الطور الأستوائي من أطوار الأنقسام الخلوي. تحصل بفعل تأثير الكثير من العوامل في البروتين Tubuline المسؤول عن تكوين خيوط مغزل الأنقسام مما يؤدي الى تثبيط عملية البلمرة (تكثيف الجزيئات Polymerization للنبيبات الدقيقة Microtubulin) والمسؤول عن سحب الكروموسومات الى قطبي الخلية, مما يؤدي الى عدم أمكانية سحب الكروموسومات الى قطبي الخلية المنقسمة وهنا أن زيادة نشاط الهرموني لمركبات هذا العقار أو مركباته التأيضية لها تأثيرات سلبية على عملية أتمام عملية الأنقسام من خلال زيادة حالات فشل تكوين خيوط المغزل.
4. التشوهات الكروموسومية في الخلايا الجنسية Chromosomal Aberration (CA)
تشير نتائج تحليل التباين الى وجود تأثير معنوي عال بمستوى (P<0.01) في كل من التركيز وفترة المعاملة والتداخل فيما بينهما للتغيرات الكروموسومية الحاصلة بعد حقن العقار Sustanon"100" , كما يلاحظ زيادة معدل التغيرات بإزدياد التركيز خاصة بعد الأسبوع الخامس من المعاملة هي الفترة الأكثر تأثيراً بإستحثاث التغيرات الكروموسومية مقارنة بالسيطرة الموجبة والسالبة.
يلاحظ من الجدول رقم (2) أن معدل التغيرات الكروموسومية لخلايا الجنسية قد ارتفع معنوياً عند تجريع الفئران المايتومايسين – سي ( السيطرة الموجبة ) عند المقارنة بالحيوانات غير المجرعة (السيطرة السالبة) حيث أصبح (0.83 , 3.7 , 1.52 , 2.55) لكلاً من الكسر الكروماتيدي والكروموسومي والقطع الكروموسومية والكروموسوم الحلقي على التوالي في حين كانت معاملة السيطرة السالبة أقل من ذلك بكثير. من المعروف أن عقار المايتومايسين – سي من المواد ذات الفعل المظفر Mutagenesis أو المسرطن Carcinogenesis يسبب ارتباطه أو متأيضاته مع المادة الوراثية لـــDNA تؤدي الى حصول كسور في أشرطة الــDNA و بالتالي إعاقة تضاعف المادة الوراثية أو في عمل Cross – Linking بين الأشرطة وبالتالي التأثير على عملية الأنقسام وأحداث التغيرات الكروموسومية.
إن نسبة التغيرات الكروموسومية بدأت بالأرتفاع بزيادة الجرعة . بمستوى معنوي (P<0.01) وذلك بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة أن هذا الأرتفاع قد يكون سبب تأثير هذا العقار أو مركباته الأيضية على الطبيعة التركيبية للكروموسومات. في الجرعة 0.01 ملغم / كغم لم يلاحظ وجود فرق معنوي خلال الأسبوع الأول من المعاملة في حين الأسبوع الثالث و الخامس أظهر فرقاً معنوياً بمستوى (P<0.05) مقارنة بالقيمة القياسية ( السالبة ) .
أما الجرعة 0.02 ملغم / كغم , فقد أشارت نتائج المقارنة بإختبار t-test الى وجود فرقاً معنوياً بزيادة التغيرات الكروموسومية عند (P<0.05) بعد اليـــــــــــوم
(7 , 21 , 35 ) من المعاملة .
وأظهرت الجرعة 0.04 ملغم / كغم فرقاً معنوياً مقارنة بالسيطرة السالبة وبالأخص بعد الأسبوع الثالث والخامس وكان مستوى الأحتمالية ( P<0.01) .
أن التغيرات الكروموسومية يمكن أن تحدث داتياً Spontanous (9) والتي تكون ضمن كفاءة أنظمة الأصلاح Repair systems في الخلايا ويمكن أن تحدث نتيجة لعوامل قد تؤثر على الطبيعة التركيبية لكروموسومات أو على ميكانيكية حركة الأنقسام وأنزيماتها. أن هناك العديد من المواد المضافة الى الأغذية كالمنبهات والمواد الهيدروكربونية وبعض الأدوية كمثال MMC و MTX (5,16) .
وغيرها من المواد ذات السمية الخلوية لها القدرة على أن تكون مواد مطفرة Mutagenic agents ولها القدرة على استحثاث التغيرات الكروموسوميــــــــــــة
أن زيادة الجرعة الكيمياوية التي تتركز في الخلية هي المسؤولة عن تلك التغيرات وأن كمية الهيدروكربونات المرتبطة مع الـDNA هي المسؤولة عن تلك التغيرات (8,9) .
يعد هذا الأختبار من الأختبارات الحيوية في كشف قابلية هذه المواد على استحثاث تلك التغيرات وبالتالي زيادة تكرارات الطفرات وحالات التسرطن .
5. التشوهات في رؤوس النطف Head spern abnormalities
تشير نتائج تحليل التباين الى وجود تأثير معنوي عال بمستوى (P<0.01) في كلا من التركيز وفترة المعاملة والتداخل فيما بينها للتشوهات في رؤوس النطف والحاصلة بعد حقن العقار , كما يلاحظ زيادة معدل تلك التشوهات بزيادة التركيز جدول (3) .
لقد اظهرت الفترة الزمنية ما بين الأسبوع الثالث والخامس من المعاملة بالعقار أعلى معدل للتشوهات في رؤوس النطف ولأغلب أنواع التشوهات . أي أن تأثير هذه المادة يكون في خلايا سلف الخلايا النطفية Spermatogonia حيث كانت أكثر حساسية من هذا العقار .
أن هذه الخلايا تظهر تشابه مع تأثير المادة المسرطنة MMC (4,11), وهذا يعني أن العقار يؤثر سلبياً في مرحلة التحول النطفي Spermiogenesis أي أن العمليات الجارية على Spermatids لكي تتطور الى نطفة Sperm (20,21,22)
ويفسر ذلك الى أن الخلايا المنوية Spermatids هي داخل خلايا سرتولي خلال عملية التحول النطفي مما يعطيها الحماية من مؤثرات هذا العقار .
رغم الزيادة العددية في أعداد النطف بعد أخذ العقار , لكن يؤشر البحث الحالي تأثيرات جانبية سلبية أضافة الى ما مؤشر في النشرة الداخلية لهذا الدواء كظهور مواد زيتية في الجلد , وزيادة مفرطة في ظهور حب الشباب ونمو الشعر في الوجه الا ان تأثيراته الخلوية والوراثية أخطر والملاحظة من خلال تشكيل النواة الصغيرة والتجمع المركزي للكروموسومات والتغيرات الكروموسومية وكذلك الزيادة في معدل التشوهات في رؤوس النطف . لذا فأن استخدام مثل هذه الأدوية خارج الأرشادات الطبية والصحية له تأثيرات صحية خطرة لذا توصي هذه الدراسة الحد من استمرار استخدامها والتوجه بعدم أو تقليل تناولها لأضرارها الجانبية وتأثيرها على صحة الفرد والمجتمع.
جدول (1) المتوسطات ± الخطأ القياسي لتأثير عقار Sustanon في مؤشر انقسام الخلايا الجنسية وتشكيل النواة الصغيرة والتجمع المركزي لكروموسومات ذكور الفئران المختبرية
الحالة عدد
الحيوانات عدد الخلايا MI
المعدل ± الخطأ القياسي MN
المعدل ± الخطأ القياسي CCA
المعدل ± الخطأ القياسي
العينة القياسية ( السيطرة السالبة) 3 600 14.66 ±0.23 0.05 ±0.03 0.05 ±0.06
عتبة MMC( السيطرة الموجبة) 3 600 5.13 ±0.65 3.26 ±0.49 3.17 ±1.22
الفئران المعاملة
الجرعة يوم
0.01 ملغم/كغم 7 3 600 15.33 ±0.37 0.94 ±0.66 1.69 ±0.83
21 3 600 17.59 ±1.12 2.05 ±0.51 2.43 ±0.55
35 3 600 18.68 ±0.63 3.14 ±0.48 4.58 ±1.44
0.02 ملغم/كغم 7 3 600 17.46 ±0.81 1.17 ±0.82 2.56 ±2.27
21 2* 400 19.43 ±0.48 2.46 ±0.54 3.19 ±0.48
35 3 600 19.65 ±1.16 3.55 ±0.71 4.33 ±1.37
0.04ملغم/كغم 7 3 600 22.09 ±2.33 1.42 ±0.33 2.68 ±1.61
21 3 600 23.62 ±1.21 3.02 ±0.42 4.17 ±0.68
35 2* 400 26.68 ±2.76 4.43 ±0.45 5.85 ±0.78
*
موت أحدى الحيوانات أثناء التجربة
MI= mitotic index
MN= micronuclei
CCA= chromosomal central associated
جدول (2) المتوسط ± الخطأ القياسي لتشوهات الكروموسومية في الخلايا الجنسية
الحالة كسر كروماتيدي كسر كروموسومي قطع كروموسومي الكروموسوم الحلقي
المتوسط ± الخطأ القياسي المتوسط ± الخطأ القياسي المتوسط ± الخطأ القياسي المتوسط ± الخطأ القياسي
حيوانات السيطرة السالبة 0.06 ± 0.06 0.06 ± 0.04 1.23 ± 0.07 0.49 ± 0.05
حيوانات السيطرة الموجبة MMC 2.55 ± 0.11 1.52 ± 0.12 3.7 ± 0.60 0.83 ± 0.46
الجرعة فترة المعاملة
0.01ملغم/كغم 7 0.29 ± 0.10 0.23 ± 0.04 0.04 ± 0.17 0.27 ± 0.16
21 0.53 ± 0.13 0.45 ± 0.08 1.11 ± 0.23 2.08 ± 0.43
35 0.69 ± 0.16 0.48 ± 0.07 1.04 ± 0.26 1.07 ± 0.33
0.02ملغم/كغم 7 0.56 ± 0.06 0.48 ± 0.05 1.08 ± 0.65 0.66 ± 0.42
21 1.53 ± 0.14 1.32 ± 0.11 1.37 ± 0.14 1.12 ± 0.65
35 1.59 ± 0.06 0.86 ± 0.05 1.88 ± 0.16 1.11 ± 0.71
0.04ملغم/كغم 7 0.68 ± 0.18 0.68 ± 0.14 1.16 ± 0.63 1.18 ± 0.64
21 1.26 ± 0.18 1.86 ± 0.11 2.23 ± 0.13 1.37 ± 0.77
35 1.44 ± 0.19 2.03 ± 0.12 2.45 ± 2.17 1.06 ± 0.88
جدول (3) المتوسط ± الخطأ القياسي لتشوهات رؤوس النطف بعد المعاملة بعقار Sustanon "100"
للفئران المختبرية
مصدر التباين معيوب الجسم الطرفي المتوسط ± الخطأ القياسي انحراف قمة كلاب الرأس المتوسط ± الخطأ القياسي انتفاخ في الرؤوس المتوسط ± الخطأ القياسي فقدان كلاب الرأس المتوسط ± الخطأ القياسي تشوهات أخرى المتوسط ± الخطأ القياسي
حيوانات السيطرة السالبة 0.05 ± 0.03 0.00 ± 0.00 0.04 ± 0.07 0.06 ± 0.04 0.17 ± 0.05
حيوانات السيطرة الموجبة MMC 0.79 ± 0.17 0.68 ± 0.11 0.40 ± 0.13 1.34 ± 0.16 1.09 ± 0.12
الحيوانات المعاملة بالعقار
الجرعة يوم
0.01ملغم/كغم 7 0.38 ± 0.05 0.23 ± 0.07 0.33 ± 0.16 0.11 ± 1.10 0.40 ± 0.17
21 0.54 ± 0.12 0.55 ± 0.32 0.55 ± 0.15 0.52 ± 0.22 1.55 ± 0.13
35 1.63 ± 0.09 0.77 ± 0.08 1.63 ± 0.16 0.88 ± 0.05 2.05 ± 0.22
0.02ملغم/كغم 7 0.79 ± 0.28 0.54 ± 0.10 0.48 ± 0.18 0.32 ± 0.06 0.65 ± 0.61
21 0.63 ± 0.33 0.76 ± 0.24 0.74 ± 0.32 0.76 ± 0.23 1.83 ± 0.21
35 1.83 ± 0.47 1.61 ± 0.39 1.52 ± 0.17 1.11 ± 0.07 3.66 ± 0.55
0.04ملغم/كغم 7 0.90 ± 0.15 0.86 ± 0.28 0.83 ± 0.19 0.84 ± 0.08 0.83 ± 0.15
21 1.87 ± 0.21 1.12 ± 0.27 1.52 ± 0.44 1.04 ± 0.27 2.11 ± 0.18
35 1.66 ± 0.53 3.70 ± 0.15 2.66 ± 0.22 1.92 ± 0.12 6.63 ± 0.16
التأثيرات السمية الخلوية والسميه الوراثية لعقار Sustanon"100" في الخلايا الجنسية الذكرية للفأر المختبري Mus musculus
الخلاصة :
تهدف هذه الدراسة الى الكشف عن التأثير السمي الخلوي والوراثي لعقار Sustanon "100" في الخلايا الجنسية الذكرية للفأر المختبري Mus musculus . اذ اخذت ثلاث جرع ( 0.04 ,0.02 , 0.01 ) ملغم / كغم من وزن الجسم من عقار Sustanon "100" . تم الفحص من خلال ( 5 ) اختبارات وهي معامل الانقسام والتجمع المركزي للكروموسومات وتشكيل النوى الصغيرة , واختبار التشوهات الكروموسومية للخلايا الجنسية وكذلك التشوهات في رؤوس النطف . تبين من النتائج ان هذا العقار له تأثير معنوي في زيادة عدد الخلايا الجنسية وتشكيل النواة الصغيرة وزيادة التجمع المركزي للكروموسومات وزيادة معدل التغيرات الكروموسومية ممثلة بـ( الكسر الكروموسومي والكروماتيدي والقطع الكروموسومية والكروموسوم الحلقي ) , وكذلك زيادة في استحثاث التشوهات في رؤوس النطف مقارنة بمعدل العينة القياسية خاصة بعد 21 , 35 يوم من حقن الدواء . لهذه التأثيرات الجانبية التي تظهر مبكراً خلال فترة المعالجة , يجب ان تتوقف المعالجة او يجب ان يستبدل العقار بعد الاستشارة الطبية .
المقدمة :
يوجد العديد من المواد الكيمياوية كالادوية والمنشطات او المنظمات التي يتناولها الانسان في الحالات العلاجية والوقائية بعضها يشكل خطراً على صحته وبعضها له تأثيرات جانبية على الوظائف الحيوية عند تناولها بأستمرار حتى عند التراكيز الضئيلة منها , ومن هذه المواد العقار Sustanon " 100" الذي يستخدم كمنشط للخلايا الجنسية للانسان والذي يعتبر من مركبات التستسرون Testosteron(T) وهو من Gonalal steroid يفرز طبيعيا في الخصى والمبايض وغدة الكظر وافرازه يخضع لسيطرة الغدة النخامية Pituitary gland وعوامل مختلفة من النخامي والتوتة (1).
تلعب هذه الهرمونات دوراً في السلوك الجنسي للحيوانات وفي عملية تكوين ونضج النطف .
إن Follicle Stimulating Hormone (FSH) يرتبط بخلايا سيرتولي Sertoli وعملية ابتداء بروتين Androgen Binding Protein (ABP)
وهو من البروتينات السكرية التي ترتبط مع Testosteron والتي تؤثر على التمايز الجنسي وبناء النطف وتطور التراكيب الثانوية الجنسية ولها تأثير على نمط السلوك الذكري (2) .
أجريت العديد من الدراسات لمعرفة التأثيرات الجانبية لبعض العقاقير الطبية فعلى سبيل المثال لا الحصر : لوحظ تقدم في انقسام الخلايا وزيادة حدوث التبادل الكروماتيدي الشقيق Sister Chromatid Exchange لخلايا نقي العظم في الفئران المعرضة الى Hycanthone, Praziaquantel المستخدمة في علاج مرضى البلهارزيا (3) , كما لوحظ زيادة تشكيل النوى الصغيرة لخلايا نقي العظم للفئران المحقونة بالعقار Mitomycin-C-MMC
الذي يعمل على زيادة حدوث Cross-Linking بين اشرطة الـDNA وبالتالي التأثير في عملية الأنقسام واحداث تغيرات كروموسومية(4) , كما ويؤدي العقارين 6-thioguanine (6-TG) و Methotrexate (MTX) المستخدمان بشكل واسع في علاج سرطان المثانة في الأنسان الى تثبيط مستوى الانقسامات في الخلايا اللمفاوية في الانسان ولكن في نفس الوقت لها تأثيران جانبية في زيادة التغيرات الكروموسومية (5) .
صنعت الكثير من هذه المواد كمنشطات غير المشخصة من حيث قدرتها أو قابليتها وتأثيرها الجانبي على المادة الوراثية . أن الدراسات في هذا الجانب ضئيلة في العراق ونتيجة للظروف التي يمر بها ازداد استخدام وتواجد مثل هذه المواد خارج سيطرة الدوائر الصحية. وللحد من استمرار استخدامها وجدت هذه الدراسة.
المواد وطرائق العمل:
استخدمت ذكور فئران مختبرية بيضاء Mus musculus ضرب Balb/C , تم الحصول عليها من البيت الحيواني / كلية العلوم / جامعة بغداد , بعمر 8-12 اسبوع , وبمعدل
وزن 25 غم .
استخدمت في التجربة (33) فأراً ذكرياً قسمت الى خمسة مجاميع :
المجموعه الاولى ( 3 فئران ) حقنــــت بالمـــــاء المقطـــر استعملــــت كسيطــــرة سالبــــة .
المجموعة الثانية ( 3فئران ) حقنت بـ0.002 ملغم / كغم من MMC استعملت كسيطرة موجبة في حين قسمت (27) الباقية إلى ثلاثة مجاميع كل مجموعة ضمت ( 9 فئران ) حقنت تحت الغشاء البريتوني
Interperitoinal بمحلول Sustanon "100" اخذت من امبولات 1 مل تحتوي على محلول مؤلف من:
Testosterone propionate 20 mg
Testosterone phenylpropionate 40 mg
Testosterone isocaproate 40 mg
من إنتاج شركة Holland
المجموعة الثالثة ( 9 فئران ) حقنت Injection تحت غشاء البريتون بـ 0.01 ملغم / كغم من وزن الجسم من مادة Sustanon لثلاث جرع خلال فترة التجربة في اليوم 1 و 14 و 28 من بدء التجربة .
المجموعة الرابعة ( 9 فئران ) حقنت بـ 0.02 ملغم / كغم من وزن الجسم من مادة Sustanon ولثلاث جرع ايضاً وللايام 1 و 14 و 28 خلال فترة التجربة .
المجموعة الخامسة ( 9 فئران ) حقنت بـ 0.04 ملغم / كغم من وزن الجسم من مادة Sustanon ولثلاث جرع اعطيت في اليوم 1 و 14 و 28 خلال فترة التجربة .
حقنت جميع الحيوانات بـ 0.2 ملم ³ من محلول الكولجيسين قبل ثلاث ساعات من التشريح للحصول على كروموسومات الخلايا المولدة للنطف ( الخلايا الجنسية ) فقد جرى الحصول عليها حسب طريقة Ohno (6) مع اجراء بعض التحويرات , حيث جرى استئصال الخصية من الحيوان , يزال غلافها وتوضع الانابيب الناقلة للنطف في محلول سترات الصوديوم الثلاثية بتركيز 1% و لمدة 20 دقيقة تحت درجة حرارة الغرفة وعمل طرد مركزي بسرعة 1500 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق , وتم التخلص من الجزء العالق وأضيف 5 مل من محلول ناقص التوتر وتركت في الحاضنة تحت 37مº لمدة ساعة يرج خلال هذه الساعة عدة مرات , بعد ذلك عمل طرد مركزي وبسرعة 1500 دورة / دقيقة لمدة 5 دقائق والتخلص من الجزء العالق وأضيف له 5 مل من المثبت الى الجزء الراسب في البداية قطرتين على الجدران الداخلية
للانبوبة والرج المستمر حتى مزج المحلول بصورة جيدة . توضع في الثلاجة 4مº لمدة نصف ساعة . حضرت الشرائح وتركت لتجف في مكان نظيف تحت درجة حرارة الغرفة.
في حين جرى حساب تشكيل النواة الصغيرة حسب طريقة ( Schmid ) (7) مع اجراء بعض التحويرات عليها حيث تم حساب النسبة المئوية لتشكيل النوى الصغيرة في 100 خلية , اما التجمع المركزي للكروموسومات فقد جرى حساب النسبة المئوية للخلايا المتجمعة في 100 خلية . ولغرض حساب مؤشر انقسام الخلايا الجنسية فقد استخدمت معادلة
Stick و (8) San, اما لحساب النسبة المئوية للتغيرات الكروموسومية فقد اعتمدت طريقة
(9) Zhu , Au في 100 خلية في الطور الاستوائي وبصورة عشوائية , ولغرض استخراج حالات التشوهات في رؤوس النطف بعد تحضيرها بواقع 100 نطفة ضمن كل شريحة .
لقد اعتمد النظام الاحصائي S.P.S.S على وفق النموذج الاحصائي لتحليل التباين بأتجاه واحد Anovo بينما قورنت المعدلات المختلفة بأستخدام طريقة اقل فرق معنوي LSD وعلى مستوى 5% (10) .
النتائج والمناقشة:
1. مؤشر انقسام الخلايا الجنسية Mitotic index (MI)
يتضح من جدول (1) حصول تثبيط في معدل انقسام الخلايا الجنسية لفئران السيطرة الموجبة المعاملة بعقار MMC مقارنة بالسيطرة السالبة , وقد اكد التحليل التباين وجود فرق معنوي بينهما عند مستوى P<0.01 إن المايتومايسين – سي معروف كمضاد للاورام بسبب كونه يعمل Cross-linking لاشرطة الـ DNA ويثبط تضاعفه وبالتالي يؤدي الى انخفاض انقسام الخلايا (11). في حين يلاحظ ارتفاع النسبة المئوية لمعامل الانقسام للفئران المعاملة بالعقارSustanon وابتداءاً من الجرعة (0.01) ملغم / كغم لتصبح ( 15.33%) بعد الاسبوع حيث اعطت فرقاً معنوياً P<0.05 مقارنة بالسيطرة الموجبة لكن هذا لم يشكل فرقاً معنوياً عند المقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة ( 14.66%)
واستر هذا الارتفاع في معامل الانقسام بعد الاسبوع الثالث والخامس حيث كان (17.59 و 18.68 ) على التوالي وكان ارتفاع معامل الانقسام لباقي التراكيز المستخدمة (0.02, 0.04) ملغم / كغم بعـــــد ثلاثـــــة وخمســـــة اسابيــع مــــــن
المعاملــــــة والاحتماليــــــة (P<0.01) لجميــــــــع الايـــــــــــام .
ان سبب ذلك يرجع الى احتواء عقار Sustanon على مركبات هرمون الشحوم الخصوي Testosteron وهذه تلعب دوراً فعالاً في تنشيط عمليات الانقسامات الخلوية . ان هــــذه المواد قــــد تعمـــــــل علــــى حـــــــث أنزيمات بلمرة الـDNA
(DNA Polymerases ) (12) الضروري لتضاعف المادة الوراثية وتحفيزها على الانقسام , أو ان هــــذه الهرمونـــــات تؤثـــــر ايجابيــــاً علـــــى انزيمــات بلمــــرة
RNA Polymerases (13) ,والتــــــي تؤثــــر علــــى بروتينــــات النمــــــو ( قوى النمو ) Growth factorsحيث إن عملية الانقسام تتطلب العديد من المتطلبات لكي يحصل انقسام النواة Karyokinesis ومــــن ثــــم انقســـــام الســـــايتوبلازم Cytokinesis (14 , 15) .
2. تشكيل النواة الصغيرة Micronuclei (MN)
يبين جدول (1) المعدل والخطأ القياسي لتشكيل النوى الصغيرة لكلاً من الفئران غير المعاملة ( السيطرة السالبة ) والفئران المعاملة بالعقارMMC ( السيطرة الموجبة ) والفئران المعاملة بالعقار المنشط لتكوين النطف Sustanon "100" . حيث يتضح حصول زيادة في معدل التشكيل النوى الصغيرة وأختلفت السيطرة السالبة على السيطرة الموجبة اختلافاً معنوياً عالياً (P<0.001) حيث ان المايتومايسين سي والذي يستخدم لمعالجة بعض حالات السرطان هو عامل قاعدي يتطلب تحول ايضي ليصبح فعال بايولوجياً ويمتلك عدة اشكال تايضية وهي:
Cishydroxy ,2.7 Diminomitosense 1-phosphate analogous وTrans 1-hydroxy.
جميع هذه الأشكال التأيضية ترتبط بــ DNA اللبائن من خلال الارتباط التساهمي مع مجموعة الـــ N2 الخاصة بقاعدة الكوانين (4,7,15) أما تأثيراته على خلايا اللبائن فأنه يؤثر على أشرطة الـــ DNA من خلال تكوين اتحادات مع هذه الاشرطة حيث يعمل على اعاقة تلك الاشرطة اثناء التضاعف مؤدياً الى حدوث تغيرات كروموسومية وبمعدلات عالية .
لقد أشارت نتائج تحليل التباين الى وجود تأثير معنوي بمستوى (P<0.05) بين كل من التركيز وفترة المعاملة والتداخل فيما بينهما لهذه الظاهرة , كما يلاحظ زيادة معدل تشكيل النوى الصغيرة بزيادة الجرعة مقارنة بالسيطرة السالبة , اي أن تأثير العقار يعتمد على الجرعة المستخدمة.
أن تشكيل النوى الصغيرة ربما ناتجة عن حالات غير الطبيعية في انقسام القطع المركزية Centromeres لكروموسومات أو ناتجة بسبب أضرار في الــDNA تقود الى عدم فعالية القطع المركزية والى عدم تشكيل خيوط المغزل (16,17) وبالتالي تؤدي الى ظهور قطع كروموسومية خالية من القطع المركزية لديها القدرة على التحام نهاياتها لتكوين تشكيلات كروية تشبه النواة بحجم صغير جداً وهنا قد تظهر نتيجة لزيادة الفعالية العالية وغير المسيطر عليها لمادة Sustanon .
3. التجمع المركزي لكروموسومات Chromosomal Central Associated
يلاحظ من الجدول (1) ان التجميع المركزي لكروموسومات الخلايا الجنسية ونتيجة المعاملة بتراكيز Sustanon قد ازداد معنوياً (P<0.05) بالمقارنة مع الفئران المحقونة بالمايتومايسين – سي لوحده , و ان قيمة التجميع المركزي لكروموسومات السيطرة السالبة كانت (0.05%) , و السيطرة الموجبة (3.17%)
والاحتمالية بينهما كانت (P<0.01) .
أما بالنسبة للفئران المحقومة بالعقار فيلاحظ زيادة هذه الظاهرة بزيادة الجرعة خاصة بعد الأسبوع الثالث والخامس ولجميع التراكيز المستخدمة .
أن ظاهرة تجميع الكروموسومات في السايتوبلازم بشكل عناقيد أو مجاميع أثناء عملية سحب الكروموسومات الى قطبي الخلية في بداية الطور الأستوائي من أطوار الأنقسام الخلوي. تحصل بفعل تأثير الكثير من العوامل في البروتين Tubuline المسؤول عن تكوين خيوط مغزل الأنقسام مما يؤدي الى تثبيط عملية البلمرة (تكثيف الجزيئات Polymerization للنبيبات الدقيقة Microtubulin) والمسؤول عن سحب الكروموسومات الى قطبي الخلية, مما يؤدي الى عدم أمكانية سحب الكروموسومات الى قطبي الخلية المنقسمة وهنا أن زيادة نشاط الهرموني لمركبات هذا العقار أو مركباته التأيضية لها تأثيرات سلبية على عملية أتمام عملية الأنقسام من خلال زيادة حالات فشل تكوين خيوط المغزل.
4. التشوهات الكروموسومية في الخلايا الجنسية Chromosomal Aberration (CA)
تشير نتائج تحليل التباين الى وجود تأثير معنوي عال بمستوى (P<0.01) في كل من التركيز وفترة المعاملة والتداخل فيما بينهما للتغيرات الكروموسومية الحاصلة بعد حقن العقار Sustanon"100" , كما يلاحظ زيادة معدل التغيرات بإزدياد التركيز خاصة بعد الأسبوع الخامس من المعاملة هي الفترة الأكثر تأثيراً بإستحثاث التغيرات الكروموسومية مقارنة بالسيطرة الموجبة والسالبة.
يلاحظ من الجدول رقم (2) أن معدل التغيرات الكروموسومية لخلايا الجنسية قد ارتفع معنوياً عند تجريع الفئران المايتومايسين – سي ( السيطرة الموجبة ) عند المقارنة بالحيوانات غير المجرعة (السيطرة السالبة) حيث أصبح (0.83 , 3.7 , 1.52 , 2.55) لكلاً من الكسر الكروماتيدي والكروموسومي والقطع الكروموسومية والكروموسوم الحلقي على التوالي في حين كانت معاملة السيطرة السالبة أقل من ذلك بكثير. من المعروف أن عقار المايتومايسين – سي من المواد ذات الفعل المظفر Mutagenesis أو المسرطن Carcinogenesis يسبب ارتباطه أو متأيضاته مع المادة الوراثية لـــDNA تؤدي الى حصول كسور في أشرطة الــDNA و بالتالي إعاقة تضاعف المادة الوراثية أو في عمل Cross – Linking بين الأشرطة وبالتالي التأثير على عملية الأنقسام وأحداث التغيرات الكروموسومية.
إن نسبة التغيرات الكروموسومية بدأت بالأرتفاع بزيادة الجرعة . بمستوى معنوي (P<0.01) وذلك بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة أن هذا الأرتفاع قد يكون سبب تأثير هذا العقار أو مركباته الأيضية على الطبيعة التركيبية للكروموسومات. في الجرعة 0.01 ملغم / كغم لم يلاحظ وجود فرق معنوي خلال الأسبوع الأول من المعاملة في حين الأسبوع الثالث و الخامس أظهر فرقاً معنوياً بمستوى (P<0.05) مقارنة بالقيمة القياسية ( السالبة ) .
أما الجرعة 0.02 ملغم / كغم , فقد أشارت نتائج المقارنة بإختبار t-test الى وجود فرقاً معنوياً بزيادة التغيرات الكروموسومية عند (P<0.05) بعد اليـــــــــــوم
(7 , 21 , 35 ) من المعاملة .
وأظهرت الجرعة 0.04 ملغم / كغم فرقاً معنوياً مقارنة بالسيطرة السالبة وبالأخص بعد الأسبوع الثالث والخامس وكان مستوى الأحتمالية ( P<0.01) .
أن التغيرات الكروموسومية يمكن أن تحدث داتياً Spontanous (9) والتي تكون ضمن كفاءة أنظمة الأصلاح Repair systems في الخلايا ويمكن أن تحدث نتيجة لعوامل قد تؤثر على الطبيعة التركيبية لكروموسومات أو على ميكانيكية حركة الأنقسام وأنزيماتها. أن هناك العديد من المواد المضافة الى الأغذية كالمنبهات والمواد الهيدروكربونية وبعض الأدوية كمثال MMC و MTX (5,16) .
وغيرها من المواد ذات السمية الخلوية لها القدرة على أن تكون مواد مطفرة Mutagenic agents ولها القدرة على استحثاث التغيرات الكروموسوميــــــــــــة
أن زيادة الجرعة الكيمياوية التي تتركز في الخلية هي المسؤولة عن تلك التغيرات وأن كمية الهيدروكربونات المرتبطة مع الـDNA هي المسؤولة عن تلك التغيرات (8,9) .
يعد هذا الأختبار من الأختبارات الحيوية في كشف قابلية هذه المواد على استحثاث تلك التغيرات وبالتالي زيادة تكرارات الطفرات وحالات التسرطن .
5. التشوهات في رؤوس النطف Head spern abnormalities
تشير نتائج تحليل التباين الى وجود تأثير معنوي عال بمستوى (P<0.01) في كلا من التركيز وفترة المعاملة والتداخل فيما بينها للتشوهات في رؤوس النطف والحاصلة بعد حقن العقار , كما يلاحظ زيادة معدل تلك التشوهات بزيادة التركيز جدول (3) .
لقد اظهرت الفترة الزمنية ما بين الأسبوع الثالث والخامس من المعاملة بالعقار أعلى معدل للتشوهات في رؤوس النطف ولأغلب أنواع التشوهات . أي أن تأثير هذه المادة يكون في خلايا سلف الخلايا النطفية Spermatogonia حيث كانت أكثر حساسية من هذا العقار .
أن هذه الخلايا تظهر تشابه مع تأثير المادة المسرطنة MMC (4,11), وهذا يعني أن العقار يؤثر سلبياً في مرحلة التحول النطفي Spermiogenesis أي أن العمليات الجارية على Spermatids لكي تتطور الى نطفة Sperm (20,21,22)
ويفسر ذلك الى أن الخلايا المنوية Spermatids هي داخل خلايا سرتولي خلال عملية التحول النطفي مما يعطيها الحماية من مؤثرات هذا العقار .
رغم الزيادة العددية في أعداد النطف بعد أخذ العقار , لكن يؤشر البحث الحالي تأثيرات جانبية سلبية أضافة الى ما مؤشر في النشرة الداخلية لهذا الدواء كظهور مواد زيتية في الجلد , وزيادة مفرطة في ظهور حب الشباب ونمو الشعر في الوجه الا ان تأثيراته الخلوية والوراثية أخطر والملاحظة من خلال تشكيل النواة الصغيرة والتجمع المركزي للكروموسومات والتغيرات الكروموسومية وكذلك الزيادة في معدل التشوهات في رؤوس النطف . لذا فأن استخدام مثل هذه الأدوية خارج الأرشادات الطبية والصحية له تأثيرات صحية خطرة لذا توصي هذه الدراسة الحد من استمرار استخدامها والتوجه بعدم أو تقليل تناولها لأضرارها الجانبية وتأثيرها على صحة الفرد والمجتمع.
جدول (1) المتوسطات ± الخطأ القياسي لتأثير عقار Sustanon في مؤشر انقسام الخلايا الجنسية وتشكيل النواة الصغيرة والتجمع المركزي لكروموسومات ذكور الفئران المختبرية
الحالة عدد
الحيوانات عدد الخلايا MI
المعدل ± الخطأ القياسي MN
المعدل ± الخطأ القياسي CCA
المعدل ± الخطأ القياسي
العينة القياسية ( السيطرة السالبة) 3 600 14.66 ±0.23 0.05 ±0.03 0.05 ±0.06
عتبة MMC( السيطرة الموجبة) 3 600 5.13 ±0.65 3.26 ±0.49 3.17 ±1.22
الفئران المعاملة
الجرعة يوم
0.01 ملغم/كغم 7 3 600 15.33 ±0.37 0.94 ±0.66 1.69 ±0.83
21 3 600 17.59 ±1.12 2.05 ±0.51 2.43 ±0.55
35 3 600 18.68 ±0.63 3.14 ±0.48 4.58 ±1.44
0.02 ملغم/كغم 7 3 600 17.46 ±0.81 1.17 ±0.82 2.56 ±2.27
21 2* 400 19.43 ±0.48 2.46 ±0.54 3.19 ±0.48
35 3 600 19.65 ±1.16 3.55 ±0.71 4.33 ±1.37
0.04ملغم/كغم 7 3 600 22.09 ±2.33 1.42 ±0.33 2.68 ±1.61
21 3 600 23.62 ±1.21 3.02 ±0.42 4.17 ±0.68
35 2* 400 26.68 ±2.76 4.43 ±0.45 5.85 ±0.78
*
موت أحدى الحيوانات أثناء التجربة
MI= mitotic index
MN= micronuclei
CCA= chromosomal central associated
جدول (2) المتوسط ± الخطأ القياسي لتشوهات الكروموسومية في الخلايا الجنسية
الحالة كسر كروماتيدي كسر كروموسومي قطع كروموسومي الكروموسوم الحلقي
المتوسط ± الخطأ القياسي المتوسط ± الخطأ القياسي المتوسط ± الخطأ القياسي المتوسط ± الخطأ القياسي
حيوانات السيطرة السالبة 0.06 ± 0.06 0.06 ± 0.04 1.23 ± 0.07 0.49 ± 0.05
حيوانات السيطرة الموجبة MMC 2.55 ± 0.11 1.52 ± 0.12 3.7 ± 0.60 0.83 ± 0.46
الجرعة فترة المعاملة
0.01ملغم/كغم 7 0.29 ± 0.10 0.23 ± 0.04 0.04 ± 0.17 0.27 ± 0.16
21 0.53 ± 0.13 0.45 ± 0.08 1.11 ± 0.23 2.08 ± 0.43
35 0.69 ± 0.16 0.48 ± 0.07 1.04 ± 0.26 1.07 ± 0.33
0.02ملغم/كغم 7 0.56 ± 0.06 0.48 ± 0.05 1.08 ± 0.65 0.66 ± 0.42
21 1.53 ± 0.14 1.32 ± 0.11 1.37 ± 0.14 1.12 ± 0.65
35 1.59 ± 0.06 0.86 ± 0.05 1.88 ± 0.16 1.11 ± 0.71
0.04ملغم/كغم 7 0.68 ± 0.18 0.68 ± 0.14 1.16 ± 0.63 1.18 ± 0.64
21 1.26 ± 0.18 1.86 ± 0.11 2.23 ± 0.13 1.37 ± 0.77
35 1.44 ± 0.19 2.03 ± 0.12 2.45 ± 2.17 1.06 ± 0.88
جدول (3) المتوسط ± الخطأ القياسي لتشوهات رؤوس النطف بعد المعاملة بعقار Sustanon "100"
للفئران المختبرية
مصدر التباين معيوب الجسم الطرفي المتوسط ± الخطأ القياسي انحراف قمة كلاب الرأس المتوسط ± الخطأ القياسي انتفاخ في الرؤوس المتوسط ± الخطأ القياسي فقدان كلاب الرأس المتوسط ± الخطأ القياسي تشوهات أخرى المتوسط ± الخطأ القياسي
حيوانات السيطرة السالبة 0.05 ± 0.03 0.00 ± 0.00 0.04 ± 0.07 0.06 ± 0.04 0.17 ± 0.05
حيوانات السيطرة الموجبة MMC 0.79 ± 0.17 0.68 ± 0.11 0.40 ± 0.13 1.34 ± 0.16 1.09 ± 0.12
الحيوانات المعاملة بالعقار
الجرعة يوم
0.01ملغم/كغم 7 0.38 ± 0.05 0.23 ± 0.07 0.33 ± 0.16 0.11 ± 1.10 0.40 ± 0.17
21 0.54 ± 0.12 0.55 ± 0.32 0.55 ± 0.15 0.52 ± 0.22 1.55 ± 0.13
35 1.63 ± 0.09 0.77 ± 0.08 1.63 ± 0.16 0.88 ± 0.05 2.05 ± 0.22
0.02ملغم/كغم 7 0.79 ± 0.28 0.54 ± 0.10 0.48 ± 0.18 0.32 ± 0.06 0.65 ± 0.61
21 0.63 ± 0.33 0.76 ± 0.24 0.74 ± 0.32 0.76 ± 0.23 1.83 ± 0.21
35 1.83 ± 0.47 1.61 ± 0.39 1.52 ± 0.17 1.11 ± 0.07 3.66 ± 0.55
0.04ملغم/كغم 7 0.90 ± 0.15 0.86 ± 0.28 0.83 ± 0.19 0.84 ± 0.08 0.83 ± 0.15
21 1.87 ± 0.21 1.12 ± 0.27 1.52 ± 0.44 1.04 ± 0.27 2.11 ± 0.18
35 1.66 ± 0.53 3.70 ± 0.15 2.66 ± 0.22 1.92 ± 0.12 6.63 ± 0.16
تعليق