• تقنية تحديد جينات تطابق الأنسجة من الطائفة الأولى والثانية(ClassI and ClassII) الموجودة على حامض(DNA) باستخدام تفاعل التسلسل البوليميريزي HLA - PCR
أستخدمت مؤخرا" تقنية (PCR) لتحديد مولد مضادات (HLA ) في الخلايا اللمفاوية, وتتميرهذه التقنية بدرجة عالية من الحساسية والتخصصية حيث تلعب دورا" هاما" في تضخيم وتوسيع ابتدائي للهدف المطلوب من ( DNA) الذي يمكن من خلالة التمييز بين مضادات مختلفة من (HLA ) بواسطة جهاز Luminex ) ) من شركة ONE LAMDA) ) وتنجز هذه التقنية على عدة مراحل وتشمل:
1. مرحلة قياس تركيز ودرجة نقاوة الحمض النووي ((DNA المستخلص من الخلايا المناعية للمريض .
2. مرحلة تكبير الحمض النووي ((DNA المستخلص.
3. مرحلة الكشف عن وجود الحمض النووي ((DNA المكبر (Amplicon) .
4. مرحلة التهجين العكسي لجينات تطابق الأنسجة .

• أولا" مرحلة قياس تركيز ودرجة نقاوة الحامض النووي ((DNA المستخلص من الخلايا المناعية للمريض .
يتم قياس تركيز ودرجة نقاوة الحمض النووي ((DNA المستخلص من الخلايا المناعية للعينات المختلفة بواسطة جهاز قياس الأطياف الضوئية ( Spectrophotometer) من شركة ((Pharmacia Biotech II . وهذاالجهاز يقيس تركيز الحمض النووي (DNA ) وفقا" للقاعدة التي تنص على أن وحدة واحده من الكثافة النوعية لإمتصاص الأطياف الفوق بنفسجية عند طول موجي 260 نانوميتر تكافئ 50 ملج / مل من الشريط المزدوج للحمض النووي (DNA ). كما أن الجهاز يعمل على قياس درجة نقاوة الحمض النووي(DNA) وذلك بحساب نسبة امتصاص الأطياف الموجية بين الطول الموجي 260 نانوميتر و الطول الموجي 280 نانوميتر, وتعبر النسبة المتراوحه بين( 1,7 - 2 نانوميتر) عن درجة نقاوه تامه للحمض النووي(DNA) في حين أن الزياده أو النقصان في هذه النسبه تعبر عن تلوث العينة بالبروتين أو الحمض النووي (RNA).
خطوات اجراء الإختبار:
1. تدون أرقام العينات حسب تسلسلها في ورقة العمل .
2. يتم اخراج العينات من الفريزر وتترك حتى تأخذ درجة حرارة الغرفة , بعد ذلك يتم البدء بعملية القياس .
3. بعد ذوبان معلق الدنا (DNA ) بداخل الأنابيب تمرركل أنبوبة على جهاز الرج ((Vortex حتى يتم مزج محتوياتها.
4. يؤخذ مقدار 7 µ من الماء المقطر بواسطة الأنبوبة الشعرية وتوضع في الخلية المخصصة للقراءة بداخل الجهاز (Cuvite) وبالضغط على زر((Conc تظهر على شاشة الجهازقراءة تعبر عن درجة التركيزالتي يتم عندها ضبط الجهاز(Blank ).
5. يؤخذ مقدار 7 µ من العينة الأولى بواسطة الأنبوبة الشعرية وتوضع في الخلية المخصصة للقراءة بداخل الجهاز (Cuvite) وبالضغط على زر((Conc تظهر على شاشة الجهازقراءة تعبر عن درجة تركيزالحمض , وبالضغط على زر((Ratio تظهر على شاشة الجهازقراءة تعبر عن درجة نقاوة الحمض .
6. تكرر الخطوة رقم 5 مع جميع العينات المختبرة وتدون النتائج الظاهرة في الخانات المخصصة لها في ورقة العمل.
7. بعد أن يتم حساب تركيز الحمض النووي(DNA) للعينات بواسطة الجهاز يخفف الحمض النووي(DNA) بالماء المقطرالى التركيز المناسب (0,1ملج / ميكروليتر) لإجراء اختبار تفاعل التسلسل البوليميريزي (PCR) ثم يحفظ عند درجة (-20ºم).
• ثانيا"مرحلة التكبير الجزيئي للحامض النووي (DNA) النقي باستخدام كاشف
(SSO (LAB Type ®من شركة ((ONE LAMBDA و جهازالدورات الحراريةGene Amp* PCR System 9700 من شركة Applide Biosystem))
تتألف تقنية PCR من ثلاث مراحل في دورة واحدة:
1- مرحلةالتفكك الحراري ( Thermal Denaturation) لجزيء (DNA) المراد تكبيره, أي فصل الشريط المزدوج (ds-DNA) إلى شريطين منفصلين (ss-DNA) , وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 94˚ م.
2- مرحلة تنسيل البادئات (Primers Annealing) أي ارتباط كل من االبادئتين مع الشريطين المنفصلين عند درجة حرارة تتراوح من (55˚م - 65˚م ) تعتمد على نوع البادئة المراد ارتباطها بالهدف.
3- تحميل البادئات المنسلة( Annealed Primers Extension) بمساعدة أنزيم البوليمريز وذلك بإضافة النيوكليوتيدات المكملة(dNTPs) ابتداء من البادئة 3 وفي اتجاه البادئة 5 ، وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 72˚م.
تعاد هذه الدورة (الخطوات الثلاثة) عدداً من المرات تتراوح من 20-35 دورة حسب حجم الحامض النووي المراد تكبيره , هذه الدورات تؤدي إلى زيادة حجم جزيئ الحامض النووي (DNA) بشكل أسي.


المواد اللازمة للاختبار والموجودة في الكاشف:
1. أطقم البادئات (LAB Type ® Primer Sets) الخاصة للارتباط بأنواع الجينات المختلفة لمستضدات توافق الأنسجة للطائفتين الأولى(B A , ) والثانية ( (DQ , DR وهي موجودة في أربعة عبوات مختلفة .
2. مخلوط السيادة LAB Type ® D-Mix) )
المواد اللازمة للاختبار والغير موجودة في الكاشف:
1. أنزيم التاغ بوليميريز( Taq polymerase) وهومن شركة
(ROCH Molecular Biochemical)) .
2. أطباق ( PCR Trays) البلاستيكية الشفافة وهي مكونة من 96 نقرة مرتبة في 12عمود و8 صفوف يوضع بداخلها (DNA) النقي للعينات .
3. لاصق قصديري (Aluminum Foil) لتغطية أطباق( (PCR .
4. حاوية للثلج المسحوق (Crush Ice Tray).
ملاحظات قبل إجراء الاختبار :
يجب أخذ جميع الاحتياطات اللازمة لعملية التضخيم .
خطوات إجراء الاختبار:
1. يتم تشغيل جهازالمقياس الحراري الدائري ((Gene Amp PCR System 9700 .
2. يتم ادخال برنامج التكبير(( LAB Type ® PCR للحمض النووي (DNA) النقي كما في الجدول الخاص بتضخيم أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى(B A , ) والثانية ( DQ , DR ) في جهاز المقياس الحراري الدائري ((Gene Amp PCR System 9700 .
3. يتم ترتيب أرقام العينات المختبرة على ورقة العمل .
4. يتم إذابة عينات (DNA) بإخراجها من الفريزر (-20°م) إلى حاوية الثلج المسحوق لحين استخدامها .
5. يضبط تركيز عينات (DNA) النقية بتخفيفها بالماء المقطر لتصل إلى درجة تركيز تساوي 20 نانوجرام/ميكروليتر.
6. ترج عبوة مخلوط السيادة ( LAB Type ® D-Mix) باستخدام الهزاز(vortex ) لمدة 5 ثواني.
7. ترج عبوات أطقم البادئات (LAB Type ® Primer Sets) الخاصة للارتباط بأنواع الجينات المختلفة لمستضدات توافق الأنسجة للطائفتين الأولى(B A , ) والثانية DQ , DR) ) باستخدام الهزاز(vortex ) لمدة 5 ثواني.

8. يجهز مخلوط لكل نوع من أنواع من أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية DQ , DR) ) يتكون من :
• البادئات الخاصة بالنوع ((LAB Type ® Primer Sets (جاهز للاستعمال وهو مختلف باختلاف العينات).
• مخلوط السيادة ( LAB Type ® D-Mix) جاهز للاستعمال.
• انزيم التاغ بوليميريز ( Taq polymerase) جاهز للاستعمال.
هذا المخلوط يحضر بنسب محددة تبعا لعدد العينات ووفقا لجدول خليط التضخيم ويحفظ مخلوط كل نوع في عبوة مختلفة يكتب عليها نوع المخلوط ثم ترج العبوات باستخدام الهزاز(vortex ) لمدة 5 ثواني بعد ذلك تحفظ في مسحوق الثلج لحين استخدامها .
9. يخصص لكل عينة من عينات الاختبار في طبق العمل أربعة نقرعمودية متتالية بحيث يوضع في كل نقرة 2 µ من العينة الواحدة من(DNA) ويتوالى صب العينات كل عينة في المكان المخصص لها وفقا لترتيب ورقة العمل مع مراعاة تسلسل أرقام العينات .
10. يوضع على كل عينة (DNA) 18 µ من مخلوط التكبير المحضر المختلف الأنواع وفقا" للنوع الجيني للمستضدات المراد تحديدها بحيث يوضع على (DNA) النقرة الأولى مخلوط A)) والنقرة الثانية لنفس العينة مخلوط ((B والنقرة الثالثة لنفس العينة مخلوط ((DR و النقرة الرابعة لنفس العينة مخلوط ((DQ وهكذا حسب ترتيب ورقة العمل وحتى انتهاء العينات.
11. يغطى طبق (PCR) باللاصق القصديري المخصص له .
12. يوضع طبق (PCR) في المكان المخصص له في جهاز المقياس الحراري الدائري
((Gene Amp PCR System 9700المبرمج ببرنامج تكبير الحامض النووي النقي الخاص بالكشف عن أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ).
13. بعد انقضاء فترة التكبير يتم إخراج طبق (PCR) من الجهاز ويوضع في حاوية مسحوق الثلج لحين إجراء عملية الكشف عن الحامض النووي المكبر للعينات (Amplicon DNA) بواسطة تمريرها في الأجروز باستخدام جهاز الفصل
الكهربي (Electro phoresis) .
14. في حالة عدم القيام بخطوة الكشف عن الحامض النووي المكبر للعينات (Amplicon DNA) بواسطة تمريرها في الأجروز باستخدام جهاز الفصل الكهربي (Electro phoresis) يحفظ طبق (PCR) المحتوي على (Amplicon DNA)
لمدة شهر في درجة حرارة (-20°م ) ولحفظه لفترات طويلة يحفظ في (-80°م ) .

ثالثا" مرحلة التهجين العكسي للحامض النووي المكبر (Amplicon DNA) باستخدام كاشف (SSO (LAB Type®شركة((ONE LAMBDA
تم إجراء خطوة التهجين العكسي للحامض النووي المكبر(Amplicon DNA) لأنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ) وفقا" لطريقة (Sequence Specific Oligotide (SSO باستخدام بادئات معلمة بتتابعات معينة من النيوكليوتيدات وتتم عملية التهجين باستخدام جهاز ) Luminex) من شركة ((ONE LAMBDA هذا الجهاز يعتمد في عمله على طريقة
(Flow Cytometry) في تحديد الجينات المضادة والموجودة في عينة الحامض النووي المكبر (Amplicon DNA) وذلك عن طريق تجميع الإشعاع الناتج من اتحاد البيوتين (Biotin) الموجود في عينة الحمض النووي المكبرة (Amplicon DNA) مع الاستربأفيدين(Strepavidin ) الموجودة في محلول المتلازم الإنزيمي للكاشف ( Conjugate ( LAB Type ® وتحويل الإشعاع إلى معلومات تقرأ بواسطة الكومبيوتر الملحق بالجهاز على صورة ذبذبات ثم تترجم النتيجة إلى أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ) الموجودة في العينة الواحدة من (DNA Amplicon) بعد ذلك يعطى أمر الطباعة للجهاز وتطبع ورقة النتيجة تظهر فيها ذبذبات القراءة المحتوية على أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ) الموجودة في العينة.
نوع العينة المستخدمة :
يستخدم لإجراء هذا الاختبار عينات الحامض النووي المكبر ( DNA Amplicon) .
الاحتياطات اللازمة قبل إجراء الاختبار :
1. المحاليل المخففة قد تسبب حروق وفي حالة حدوث ضرريجب غسل العين أو الجلد بمقدار كافي من الماء لمدة 15 دقيقة في وقتها وإزالة الملابس والأحذية الملوثة.
2. خليط كريات لابتايب LABTYPE ® لها حساسية للضوء فيجب وقايتها من الضوء.
3. لا يستخدم خليط كريات لابتايب LABTYPE ® بعد مرور ثلاثة أشهر من اذابتها.
4. كل مكثفات تفاعل LABTYPE ® والمعادلات للمحاليل يجب أن تحفظ بأمان في (-520م ) إلى ( - 580م ) في صندوق المنتج مع تجنب الحمل غير اللازم والضروري ويوصى بحفظها داخل صندوقها مباشرة وتبرد أكثر حتى تكون جاهزة للاستخدام ويجب حفظ خليط الكرية في درجة (52م) إلى (58م) وعدم تركها للتجمد لأن الغرض من استخدامها كمذيب.
لايستخدم الكاشف اذا ظهرت به بعض من هذه الظواهر:
• الكريات تكون لا لونية وغير مستخدمة.
• إذا خرجت أملاح في أي منتج خلال الشحن أو التخزين يجب إعادة اذابتها بدرجة حرارة الغرفة ( 520م إلى 525م) .
• عينة الإشعاع (D – mix) إذا امتصت في درجة حرارة الغرفة ( 520م إلى 525م) يجب أن تكون لونها قرنفلي إلى اللارجواني ولاتستخدم اذا تغير اللون.
الخطوات الأساسية للاختبار:
تتم عملية التهجين العكسي لأنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ) على عدة مراحل وهي :
1. مرحلة التفكك الحراري ( DENATURATION) لشريطي الحمض النووي المكبر.
2. مرحلة معادلة ( (NEUTRALIZATIONشريط الحمض النووي بعد التفكيك .
3. مرحلة التهجين العكسي ( ( HYBRIDIZATIONلجزيئات الحامض النووي المكبرة باستخدام البادئات المعلمة لأنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ) .
4. مرحلة التعليم LABELING)) للكشف عن ناتج التهجين .

المواد اللازمة لتشغيل جهاز القراءة (LAB SCAN 100) من شركة (Luminex):
1. محلول معايرة الكريات بداخل الجهاز(Calibration Micro spheres).
2. محلول ضبط الكريات في الجهاز ((Control Micro spheres .
3. محلول غسيل الأجزاء الداخلية للجهاز(Sheath Fluid).
4. كحول الإيثانول بتركيز 70%.
5. ماء مقطر متأين (Deionized Distal Water ).

الأجزاء الملحقة بالجهاز :
1. منصة أطباق القراءة: وهي منطقة مخصصة يوضع عليها طبق القراءة الخاص بجهاز (Luminex) حتى تتم قراءة النتائج آليا" داخل الجهاز.
2. محلل للنتائج (LAB SCAN 100) من شركة (Luminex) الذي يعمل على تقديروتحديد الكثافة الفلورية (Flow Scant interesting ) النلتجة عن تهجين الكريات المتخصصة للأنواع المختلفة من جينات مستضدات التوافق النسيجي.

المواد اللازمة للاختبار الموجودة في الكاشف :
1) مخليط الكريات المغلفة بالبادئات المعلمة الخاصة بكل نوع من أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR ) (SSO Beed Mixtures (LAB Type ®وهي موجوده في أربعة عبوات مختلفة .

2) المحاليل وتشمل

• محلول التفكك ( DB) Denaturation Buffer)) .
• محلول معادل (NB)(Neutralization Buffer) .
• محلول التهجين (HB)(Hyperdization Buffer) .
• محلول الغسيل (WB)(Washing Buffer) .
• عبوة محلول المتلازم الانزيمي المعلم بالاستربأفيدين ((Strepavidin المخفف (SB).
• عبوة محلول المتلازم الانزيمي المعلم بالاستربأفيدين Strepavidin)) المركز (SS).
المواد اللازمة للاختبار وغيرمجودة في الكاشف :
1. أطباق للعمل ويمكن استخدام ( PCR Trays) البلاستيكية الشفافة وهي مكونة من 96 نقرة مرتبة في 12عمود و8 صفوف يوضع بداخلها عينات الحامض النووي المكبر (Amplicon DNA) المراد تهجينها .
2. لاصق قصديري (Aluminum Foil) لتغطية أطباق العمل .
3. حاوية للثلج المسحوق (Crush Ice Tray).

التحضيرات :
1. تحضير خليط تهجين الكريات ((HBM
(Hybridization Beed Mixture)
يحضرمخلوط الكريات المهجنة ((HBM لكل نوع من أنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR) باضافة كمية محددة من محلول التهجين الى كمية محددة من مخلوط الكريات المتخصصة لأنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR) حسب عدد العينات وفقا" للجدول التالي , بعد ذلك يحفظ كل مخلوط في عبوة مختلفة يكتب عليها من الخارج اسم المخلوط ونوعه .
2. تحضير محلول المتلازم الانزيمي المعلم بالاستربأفيدين(SAPE Solution)
يحضر محلول المتلازم الانزيمي المعلم بالاستربأفيدين باضافة كمية محدودة من المتلازم الانزيمي المركز(( SS الى كمية محدودة من المتلازم الانزيمي المخفف (SB) بحيث تكون نسبة التخفيف 100:1
خطوات اجراء الاختبار :
1. تشغيل جهاز المقياس الحراري الدائري ((Gene Amp PCR System 9700 .
2. ادخال برنامج التهجين(Amplicon DNA Hybridization SSO (LAB Type®
لأنواع جينات المستضدات المختلفة لتوافق الأنسجة للطائفتين الأولى (B A , ) والثانية ( DQ , DR) مع مراعاة أن عملية التهجين تتم عند درجة حرارة (60°م).
3. يتم اخراج طبق عينات الحامض النووي المكبرة ( (Amplicon DNAمن الفريزر (-20°م ) وتنقل الى حاوية الثلج المسحوق .
4. يستخدم طبق جديد للعمل من أطباق (PCR) ويوضع على حامل الأطباق.
5. يؤخذ 5µ من كل حمض نووي مكبر( (DNA Amplicon من طبق التكبير( الموضوع على حاوية الثلج المسحوق) وتوضع في المكان المواجه لها في طبق التهجبن (الموضوع على حامل الأطباق) .
6. يضاف 2.5 µ من محلول التفكيك (DB) الى جميع العينات في طبق التهجين ثم يوضع الطبق على جهاز رج الأطباق (Plate Vortex) لمدة 10 ثواني بعدها يحضن الطبق لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة (20°م -25°م).
7. بعد انتهاء مدة التحضين يضاف 5µ من المحلول المعادل (NB) الى جميع العينات الموجودة في طبق التهجين مع ملاحظة اختفاء لمن السائل فور وضع المحلول ثم يوضع الطبق على جهاز رج الأطباق (Plate Vortex) لمدة 10 ثواني .
8. يوضع طبق التهجين المعادل على حاوية الثلج المسحوق لمدة تتراوح من (5-10) دقائق.
9. تحضر مخاليط تهجين الكريات ((HBM وفقا" لطريقة التحضير السابقة.
10. يضاف على كل عينة حمض نووي في طبق التهجين 38 µ من مخلوط تهجين الكريات وفقا" للنوع الجيني لمستضدات توافق الأنسجة المراد تحديده بحيث يوضع على (DNA) النقرة الأولى مخلوط الكريةA) ) والنقرة الثانية لنفس العينة مخلوط الكرية ((B والنقرة الثالثة لنفس العينة مخلوط الكرية ((DR و النقرة الرابعة لنفس العينة مخلوط الكرية ((DQ وهكذا حسب ترتيب ورقة العمل وحتى انتهاء العينات .
11. يرفع طبق التهجين من حاوية الثلج ويغطى باللاصق القصديري ثم يحضن في جهاز المقياس الحراري الدائري ((Gene Amp PCR System 9700 عند (60°م) لمدة 15 دقيقة.
12. بعد انتهاء فترة التحضين ينقل الطبق على حامل الأطباق ثم ينزع اللاصق بحرص منعا" للتلوث.
13. باستخدام الماصة متعددة الرؤوس يضاف 100 µ من محلول الغسيل (WB) الى جميع عينات الطبق, ثم يغطى الطبق باللاصق القصديري ويوضع في ثلاجة الطرد المركزي (Refrigerator Centrifuge ) الخاصة بالأطباق على سرعة 2500rpm ولمدة 5 دقائق.
14. بعد مرور الوقت ينقل الطبق من ثلاجة الطرد المركزي (Refrigerator Centrifuge ) الى حامل الأطباق ثم ينزع اللاصق بحرص ويتم التخلص من محلول الغسيل (WB) بواسطة قلب الطبق على ورق نشاف خاص .
15. تكرر الخطوتين 13 و 14 ثلاثة مرات.
16. قبل انهاء خطوة الغسيل يحضر محلول المتلازم الانزيمي المعلم باللأستربأفيدين
( SAPE Solution) وفقا" لطريقة التحضير السابقة .
17. ينقل طبق التهجين من ثلاجة الطرد المركزي (Refrigerator Centrifuge ) الى حامل الأطباق ثم يضاف 50 µ من محلول المتلازم الإنزيمي المعلم باللأستربأفيدين
( SAPE Solution) الى جميع عينات الطبق بعدها يغطى الطبق باللاصق القصديري ويرج بواسطة جهاز رج الأطباق (Plate Vortex) لمدة 10 ثواني.
18. يحضن طبق التهجين في جهاز المقياس الحراري الدائري
((Gene Amp PCR System 9700 عند (60°م) لمدة 5 دقيقة.
19. بعد انتهاء فترة التحضين ينقل طبق التهجين الى حامل الأطباق وينزع اللاصق القصديري ثم تجرى عملية الغسيل باستخدام (WB) وتكرر ثلاثة مرات كما في الخطوتين (13,14) .
20. يضاف 70µ من محلول الغسيل (WB) الى جميع عينات طبق التهجين مع القيام بالمزج الخفيف بواسطة الماصة المستخدمة ثم تنقل كل عينة بعد مزجها بمحلول الغسيل (WB) الى الخانة التى تقابلها في طبق القراءة الخاص بجهاز (LUMENIX) وفي حالة عدم التمكن من قراءة النتائج بعد اجراء عملية التهجين مباشرة يجب حفظ الطبق في مكان مظلم لحين قراءتة.
21. يتم تشغيل جهاز القراءة (LUMENIX) .
22. يغسل جهاز القراءة بواسطة 70% كحول الايثانول ثم بواسطة محلول الغسيل الخاص بالجهاز (Sheath Solution ) .
23. يعاير الجهاز بواسطة محلول ضبط الكريات المعلمة (Control Microsphere) حسب الطريقة المدرجة في الكتيب الخاص بعمل الجهاز.
24. يتم إدخال الرقم التسلسلي لكل كاشف من الكواشف المستخدمة في العمل .
25. يتم إدخال أرقام وبيانات العينات في الجهاز حسب الترتيب الموجود في ورقة العمل, حيث تظهر على شاشة الكومبيوتر الملحق بالجهاز صورة العينات في طبق القراءة مطابقة تماما" لورقة العمل.
26. يوضع طبق القراءة على منصة القراءة في الجهاز في الاتجاه الصحيح بعد ذلك يتم اختيار خانة (بدء القراءة) من الشاشة.
27. بعد انتهاء الجهاز من قراءة جميع العينات تظهر النتيجة على الشاشة في صورة ذبذبات تحدد الأنواع المختلفة لمستضدات توافق الأنسجة يترجمها الجهاز لنوع المستضدات الموجودة في كل عينة على حدى .
بعد الانتهاء من قراءة النتائج لابد من غسيل الجهاز مرتين بالمحلول الخاص بالغسيل وثلاثة مرات بالماء المقطر المتأين ثم يتم إغلاق الجهاز لحين استخدامه مرة أخرى