تويت
دراسة الصفات المزرعية للبكتيريا Bacterial cultural characteristics
الهدف: دراسة أشكال ومظاهر النمو المختلفة للبكتيريا على مختلف الاوساط الغذائية
- تعتبر من أهم الدراسات لتعريف وتصنيف البكتيريا
- تعطي وصف دقيق للبكتيريا أثناء نموها على الأوساط الصلبة والسائلة
أولا: وصف النمو البكتيري على البيئات الصلبة في أطباق بتري Solid media
1- شكل المستعمرة Colony form: ومن أهم الأشكال
نقطية- دائرية- خيطية- جذرية- غير منتظمة- مغزلية
2- ارتفاع المستعمرة Colony elevation :
مسطحة- مرتفعة- محدبة- كثيرة التحدب- مرتفعة المركز
3- شكل حافة المستعمرة Colony margin :
كاملة- مموجة- مفصصة- مسننة- خيطية- مجعدة
4- سطح المستعمرة Colony surface
ناعم- خشن
5- الصفات الضوئية للمستعمرة Colony optics
معتمة- شبه شفافة- شفافة
6- حجم المستعمرة Colony size
7- لون المستعمرة ( انتاج الصبغات)Pigmentation
ملونة- غير ملونة
8- الرائحة Odor
متعفنة- عطرية- بدون رائحة
9- قوام المستعمرة Colony consistency
غشائي- لزج (مخاطي)- زبدي- هش
10- التأثير في الدم Hemolytic activity
تحلل الدم تحليل كامل Beta hemolysis – تحلل الدم جزئيا Alpha hemolysis
لاتحلل الدمor non hemolysis Gamma hemolysis
ثانيا: مظاهر النمو البكتيري على انبوبة الاجار المائل Nutrient agar slant
1- كمية النمو Growth amount
لايوجد نمو- قليل- متوسط- غزير
2- اللون
على النمو نفسه- منتشر في البيئة
3- الصفات الضوئية والشفافية
4- شكل النمو
خيطي- منتظم- مسنن- سبحي- منتشر- متفرع
ثالثا: وصف النمو البكتيري في البيئات السائلة Liquid media
1- كمية النمو Growth amount
ضئيل- متوسط- غزير
2- شكل النمو Growth form
خيطي- مسنن- خرزي- منتشر- جذري- شجري-
3- النمو على السطح
لايوجد- حلقي- رقيق- غشائي- صوفاني
5- النمو تحت السطح
لايوجد- عكر- حبيبي- صوفاني- قشاري
6- النمو المترسب
لايوجد- حبيبي- صوفاني- قشاري- لزج- جليدي
الطرق المختلفة لزراعة الأنواع البكتيرية
س: لماذا اختلفت طرق زراعة البكتيريا؟
- يمكن زراعة البكتيريا بعدة طرق:
البيئة السائلة
الاجار المائل
الاجار العميق
الزراعة السطحية على بيئة اجار مغذي Surface plate
الزراعة العميقة على بيئة الاجار المغذي Pour plate
دراسة الصفات الشكلية للخلايا البكتيرية Morphological Studies
( صبغ الخلايا البكتيرية Bacterial Staining )
الصبغ هو دراسة مورفولوجية يقصد بها دراسة شكل الخلية البكتيري
س: لماذا تصبغ الخلايا البكتيرية؟
الطرق العامة للصبغ تختلف باختلاف الدراسة والغرض
تبدأ عملية فحص الخلايا البكتيرية بتحضير الغشاء البكتيري ثم يتم الصبغ وبعده الفحص بالمجهر باستخدام العدسة الزيتية.
تحضير الغشاء البكتيري Smear preparation
1- تحت ظروف التعقيم, ينقل الى منتصف شريحة زجاجية نظيفة قطرة من الماء المقطر
2- باستخدام ابرة التلقيح المعقمة ينقل جزء من المزرعة البكتيرية حديثة العمر ويخلط مع قطرة الماء, ويفرد الغشاء على الشريحة
3- تترك الشريحة لتجف في جو المعمل
4- يثبت الغشاء البكتيري بتمريره على اللهب من 3-4 مرات
5- تترك الشريحة لتبرد
صبغ جرام Gram Stain
- تعتبر صبغة مركبة Compound stain – وصبغة تفريقية Differential stain
- من أهم طرق الصبغ شيوعا في المختبرات الميكروبيولوجية
- أول من استخدمها كريستيان جرام
تكمن أهميتها في استعمالها لتشخيص البكتيريا حيث بواسطتها يمكن تقسيم البكتيريا الى قسمين: Gram positive bacteria - Gram negative bacteria
- لها أهمية في توضيح الاختلافات الاساسية في تركيب الجدار الخلوي للبكتيريا
الغرض من صبغ جرام: معرفة شكل الخلايا البكتيرية- انتظامها- الاستجابة
طريقة الصبغ: Stain technique
1- يتم اعداد غشاء بكتيري وتثبيته كما سبق
2- يغمر الغشاء البكتيري بكمية مناسبة من صبغة الكريستال البنفسجسي لمدة دقيقة
3- يغسل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
4- يغمر الغشاء بكمية مناسبة من اليود لمدة دقيقة
5- يغسل الغشاء البكتيري بالكحول 70% بوضع مائل حتى تنزل القطرات شبه رائقة
6- يغشل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
7- يغمر الغشاء بصبغة الصفرانين لمدة دقيقة
8- يغسل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
9- تجفف الشريحة بين ورقتي ترشيح
10-تفحص الشريحة باستخدام العدسة الزيتية وزيت السيدر
المشاهدة: اذا تلونت الخلايا بلون أزرق بنفسجي تكون موجبة لجرام
اذا ظهرت الخلايا بلون احمر تكون سالبة لجرام
ملاحظة: استعمال المحاليل الصبغية بصورة غير كافية من ناحية الكمية أو الوقت ينتج عنه صبغ غير جيد وتتاثر النتيجة
- لماذا اختلفت البكتيريا في استجابتها لصبغ جرام؟
- هل تتغير استجابة البكتيريا لصبغ جرام؟
- لماذا يستخدم زيت السيدر اثناء فحص الغشاء البكتيري؟
الصبغ السالب Negative Stain
س: لماذا سمي صبغ سالب؟
الهدف من الصبغ السالب: معرفة شكل الخلايا اليكتيرية- انتظامها
طريقة العمل:
1- تحت ظروف التعقيم, باستخدام ابرة التلقيح المعقمة ينقل جزء من اللقاح البكتيري ويوضع على طرف الشريحة
2- تضاف قطرة من صبغة النيجروسين الى النمو البكتيري وتخلط جيدا
3- يفرد الخليط على الشريحة بطريقة متجانسة بواسطة شريحة أخرى
4- تترك الشريحة تجف في جو المعمل
5- تفحص الشريحة باستخدام العدسة الزيتية وتسجل النتيجة
الهدف: دراسة أشكال ومظاهر النمو المختلفة للبكتيريا على مختلف الاوساط الغذائية
- تعتبر من أهم الدراسات لتعريف وتصنيف البكتيريا
- تعطي وصف دقيق للبكتيريا أثناء نموها على الأوساط الصلبة والسائلة
أولا: وصف النمو البكتيري على البيئات الصلبة في أطباق بتري Solid media
1- شكل المستعمرة Colony form: ومن أهم الأشكال
نقطية- دائرية- خيطية- جذرية- غير منتظمة- مغزلية
2- ارتفاع المستعمرة Colony elevation :
مسطحة- مرتفعة- محدبة- كثيرة التحدب- مرتفعة المركز
3- شكل حافة المستعمرة Colony margin :
كاملة- مموجة- مفصصة- مسننة- خيطية- مجعدة
4- سطح المستعمرة Colony surface
ناعم- خشن
5- الصفات الضوئية للمستعمرة Colony optics
معتمة- شبه شفافة- شفافة
6- حجم المستعمرة Colony size
7- لون المستعمرة ( انتاج الصبغات)Pigmentation
ملونة- غير ملونة
8- الرائحة Odor
متعفنة- عطرية- بدون رائحة
9- قوام المستعمرة Colony consistency
غشائي- لزج (مخاطي)- زبدي- هش
10- التأثير في الدم Hemolytic activity
تحلل الدم تحليل كامل Beta hemolysis – تحلل الدم جزئيا Alpha hemolysis
لاتحلل الدمor non hemolysis Gamma hemolysis
ثانيا: مظاهر النمو البكتيري على انبوبة الاجار المائل Nutrient agar slant
1- كمية النمو Growth amount
لايوجد نمو- قليل- متوسط- غزير
2- اللون
على النمو نفسه- منتشر في البيئة
3- الصفات الضوئية والشفافية
4- شكل النمو
خيطي- منتظم- مسنن- سبحي- منتشر- متفرع
ثالثا: وصف النمو البكتيري في البيئات السائلة Liquid media
1- كمية النمو Growth amount
ضئيل- متوسط- غزير
2- شكل النمو Growth form
خيطي- مسنن- خرزي- منتشر- جذري- شجري-
3- النمو على السطح
لايوجد- حلقي- رقيق- غشائي- صوفاني
5- النمو تحت السطح
لايوجد- عكر- حبيبي- صوفاني- قشاري
6- النمو المترسب
لايوجد- حبيبي- صوفاني- قشاري- لزج- جليدي
الطرق المختلفة لزراعة الأنواع البكتيرية
س: لماذا اختلفت طرق زراعة البكتيريا؟
- يمكن زراعة البكتيريا بعدة طرق:
البيئة السائلة
الاجار المائل
الاجار العميق
الزراعة السطحية على بيئة اجار مغذي Surface plate
الزراعة العميقة على بيئة الاجار المغذي Pour plate
دراسة الصفات الشكلية للخلايا البكتيرية Morphological Studies
( صبغ الخلايا البكتيرية Bacterial Staining )
الصبغ هو دراسة مورفولوجية يقصد بها دراسة شكل الخلية البكتيري
س: لماذا تصبغ الخلايا البكتيرية؟
الطرق العامة للصبغ تختلف باختلاف الدراسة والغرض
تبدأ عملية فحص الخلايا البكتيرية بتحضير الغشاء البكتيري ثم يتم الصبغ وبعده الفحص بالمجهر باستخدام العدسة الزيتية.
تحضير الغشاء البكتيري Smear preparation
1- تحت ظروف التعقيم, ينقل الى منتصف شريحة زجاجية نظيفة قطرة من الماء المقطر
2- باستخدام ابرة التلقيح المعقمة ينقل جزء من المزرعة البكتيرية حديثة العمر ويخلط مع قطرة الماء, ويفرد الغشاء على الشريحة
3- تترك الشريحة لتجف في جو المعمل
4- يثبت الغشاء البكتيري بتمريره على اللهب من 3-4 مرات
5- تترك الشريحة لتبرد
صبغ جرام Gram Stain
- تعتبر صبغة مركبة Compound stain – وصبغة تفريقية Differential stain
- من أهم طرق الصبغ شيوعا في المختبرات الميكروبيولوجية
- أول من استخدمها كريستيان جرام
تكمن أهميتها في استعمالها لتشخيص البكتيريا حيث بواسطتها يمكن تقسيم البكتيريا الى قسمين: Gram positive bacteria - Gram negative bacteria
- لها أهمية في توضيح الاختلافات الاساسية في تركيب الجدار الخلوي للبكتيريا
الغرض من صبغ جرام: معرفة شكل الخلايا البكتيرية- انتظامها- الاستجابة
طريقة الصبغ: Stain technique
1- يتم اعداد غشاء بكتيري وتثبيته كما سبق
2- يغمر الغشاء البكتيري بكمية مناسبة من صبغة الكريستال البنفسجسي لمدة دقيقة
3- يغسل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
4- يغمر الغشاء بكمية مناسبة من اليود لمدة دقيقة
5- يغسل الغشاء البكتيري بالكحول 70% بوضع مائل حتى تنزل القطرات شبه رائقة
6- يغشل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
7- يغمر الغشاء بصبغة الصفرانين لمدة دقيقة
8- يغسل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
9- تجفف الشريحة بين ورقتي ترشيح
10-تفحص الشريحة باستخدام العدسة الزيتية وزيت السيدر
المشاهدة: اذا تلونت الخلايا بلون أزرق بنفسجي تكون موجبة لجرام
اذا ظهرت الخلايا بلون احمر تكون سالبة لجرام
ملاحظة: استعمال المحاليل الصبغية بصورة غير كافية من ناحية الكمية أو الوقت ينتج عنه صبغ غير جيد وتتاثر النتيجة
- لماذا اختلفت البكتيريا في استجابتها لصبغ جرام؟
- هل تتغير استجابة البكتيريا لصبغ جرام؟
- لماذا يستخدم زيت السيدر اثناء فحص الغشاء البكتيري؟
الصبغ السالب Negative Stain
س: لماذا سمي صبغ سالب؟
الهدف من الصبغ السالب: معرفة شكل الخلايا اليكتيرية- انتظامها
طريقة العمل:
1- تحت ظروف التعقيم, باستخدام ابرة التلقيح المعقمة ينقل جزء من اللقاح البكتيري ويوضع على طرف الشريحة
2- تضاف قطرة من صبغة النيجروسين الى النمو البكتيري وتخلط جيدا
3- يفرد الخليط على الشريحة بطريقة متجانسة بواسطة شريحة أخرى
4- تترك الشريحة تجف في جو المعمل
5- تفحص الشريحة باستخدام العدسة الزيتية وتسجل النتيجة
تعليق