الأوساط الزرعية
المقدمة : تستخدم الأوساط الزرعية في المختبر للحصول على نمو للبكتريا أو الميكروبات الأخرى ، تختلف الأوساط الزرعية حسب قوامها أو تخصصها أو تصنيعها .
تصنيف ألأوساط الزرعية :
أولاً :تقسم الأوساط الزرعية حسب قوامها إلى :
1- الأوساط الزرعية الصلبة Solid Media
تستخدم لتنمية الميكروبات وملاحظة شكل المستعمرات وألوانها وقابلية الميكروبات لإنتاج صبغات معينة . كما في تنمية بكتريا Pseudomonas aerogenosa على وسط Nutrient Agar حيث تكسبه لون أخضر نتيجة إفرازها صبغة Pyocynin

2- الأوساط الزرعية السائلة Liquid Media
تستخدم للتنمية أيضاً لكن ( لا نلاحظ مستعمرات ) وقابلية البكتريا على إنتاج غاز CO2 كما في تنمية بكتريا E. coli في وسط MacConky Broth حيث يكشف عن قابلية إنتاجها للغاز بوضع Derham tube في test tube . أو لملاحظة طبيعة نمو بعض أنوع البكتريا كما في تنمية Yersinia pestis في وسط Nutrient Broth حيث يكون النمو بشكل أعمدة تتدلى من أعلى الوسط الزرعي عند تغطيته بمادة دهنية أو شمعية ويسمى النمو هذا Stalaetits growth .

3- الأوساط الزرعية الشبه صلبة Semisolid Media
للتنمية وملاحظة حركة البكتريا وتخمرها لنوع معين من السكريات وإنتاجها صبغات أو غاز H2S كما في وسط Semisolid Mannitol

ثانياً : تقسم الأوساط الزرعية حسب تصنيعها إلى :
1 - أوساط طبيعية Natural Media
أوساط طبيعية تستخدم كما هي لتنمية الميكروبات مثل عصير الذرة أو عصير التمر تستخدم لتنمية بعض الخمائر .
2 - أوساط مبسطة Synthitic Media
تكون معروفة التركيب والأوزان .
3 – أوساط زرعية نصف مصنعة Semisynthsis Media
أوساط مصنعة تضاف لها مواد طبيعية مثل الدم أو المصل لأغناءها ولعزل ميكروبات معينة .

ثالثاً : تقسم الأوساط الزرعية حسب تركيبها إلى :
1- معقدة التركيب Complex Media
أوساط تتكون من عدد كبير من المواد الغذائية الخاصة والمساعدة لبناء تراكيب خلوية .
والبكتريا التي تحتاج متطلبات غذائية كثيرة ومعقدة تسمى fastidious bacteria كما في تنمية Mycobacterium tuberculosis
2 - بسيطة التركيب Simple Media
هناك أحياء مجهرية سهلة التنمية ممكن لها العيش في أبسط الظروف المتوفرة مثل بكتريا Pseudomonus aerogenosa .
ملاحظة : تحتاج بعض الأوساط لأضافة بعض المعادن أو الأحماض الأمينية ولو بكميات قليلة لتشجيع نمو الميكروبات أو تضاف مواد مثبطة تسهل نمو ميكروبات معينة على حساب ميكروبات أخرى

رابعا : تقسم الأوساط الزرعية حسب التخصص إلى :
1 – الأوساط الإغنائية : Enrichment Media
يضاف الدم او المصل او المستخلص النبات او الحيوان او الفيتامينات الى وسط N.broth , N .agar لتساعد على نمو أفضل كما في وسط Selenite Broth
وBlood Agar
2 – ألأوساط ألأختيارية : Selective Media
تضاف بعض المواد الكيميائية للوسط الزرعي لأجل منع نمو واحد أو مجموعة من البكتريا وليس الأنواع الأخرى مثل إضافة Eiosine أو Crysyal violet أو Methyline blue تؤدي لنمو أنواع معينة من البكتريا وتمنع نمو ألأنواع الأخرى مثل وسط MacConky Agar و EMB
3 - ألأوساط ألتفريقية : Differential Media
أوساط ينمو عليها نوعين أو أكثر من البكتريا ويمكن تفريقها عن بعضها . مثل وسط Blood Agar يفرق بين الأنواع المحللة للدم من الأنواع الغير محللة
4 – الأوساط الحية : Living Media
تتكون من خلايا أو أنسجة نباتية أو حيوانية توضع في وسط غذائي ملائم ومن الm.o
التي تنمو أجبارياً على هذه ألأوساط هي الفيروسات
5 – ألأوساط الحافظة : Maintains Media
تستعمل للحفاظ على حيوية البكتريا والخواص الفسلجية لمدة معينة . ويفضّل عدم أضافة الكلوكوز لهذه الأوساط إذ إنّ النمو السريع يصاحبه موت سريع للميكروب ولكل بكتريا وسط حافظ خاص بها .
6 – الأوساط التحليلية : Assay Media
أوساط معروفة كيميائياً ( صناعياً ) تستخدم لتقييم بعض المواد مثل الفيتامينات و الحوامض ألأمينية والمضادات الحيوية .
أهم المواد الداخلة في تركيب ألأوساط الزرعية وفائدتها :
1 – مستخلص الخميرة Yeast extract : بروتين ضروري كمصدر طاقة
2 – الببتون Pepton : مصدر للطاقة سريع الاستهلاك من قبل البكتريا .
3 – السكريات :
1- السكريات الأحادية : مباشرة الأستهلاك من قبل البكتريا مثل : الكلوكوز والفركتوز والكلاكتوز و المانوز .... إلخ
2- السكريات الثنائية : تحتاج إنزيمات تفرزها البكتريا لتحويلها إلى سكر أحادي مثل :
1 – Lactose ( B-galactosidase )
2 – Maltose ( Maltase )
3 – Sucrose ( Sucrase )
3- السكريات المتعددة : تحتاج إلى إنزيمات خاصة لتحويلها إلى سكريات أبسط وصولاً إلى سكر الكلوكوز الذي يعتبر الشكل الوحيد الممكن إستهلاكه من قبل الميكروب لتحرير الطاقة .
فائدة إضافتها : للكشف عن قابلية البكتريا على تخمير السكريات أو إمتصاصها وبالتالي إنتاجها لحامض فقط أو حامض و غاز مثلاً :
E.coli تنتج حامض مع غاز في وسط MacConky Broth بينما ال Shigella تنتج حامض بدون غاز

4 – كلوريد الصوديوم NaCl : للمحافضة على التوازن الأزموزي Osmatic Balance

5 - أملاح الفوسفات : kH2PO4, k2HPO4

6 – مركبات نتروجينية : مثل النترات NO3 ( حالة أكسدة ) والأمونيا NH3 ( حالة أحتزالية عالية ) وتمثلان مصادر لا عضوية ، الأمونيا الشكل المستهلك من قبل البكتريا وإذا ما وجد نترات وأمونيا في في نفس الوسط سوف تستهلك البكتريا الأمونيا أولاً حتى وإن كانت مستهلكة للنترات
أما المصادر العضوية فتمثل ألأحماض ألأمينية Amino acid

7 – آيونات الحديد :

8 – المغنيسيوم : مهم للأحياء المجهرية حيث يدخل في :
1 – بناء التراكيب الخلوية مثل الأحماض ألأمينية
2 – بناء الجدار الخلوي والغشاء الخلوي
3 – مساعدة الأنزيمات

9 – الكبريت : تتحول آيونات الكبريتات إلى عدة أشكال وصولاً لتكوين H2S
حيث تستخدم في بعض ألأوساط مادة Thiosulphate يعتبر حالة مختزلة للكبريت يتحول إلى كبريتات وتعتبر حالة مؤكسدة ونتيجة التحول تنتج طاقة .

10 – المواد المثبطة : وتشمل :
1 – Crystale violet
2 – Brillient green
3 – Brillient green + Iodine
هذه تثبط ال G+
4 – Na- biselenite
5 – Bile salte
11 – الكواشف : تعرف بأنها قواعد أو حوامض ضعيفة لها ألوان مختلفة في الحالة القاعدية من الحامضية أو يكون لها لون واحد بحيث تكون في أحدى الحالتين ملّونة وفي ألأخرى عديمة اللون
مع تحياتي ... البكتريولوجي عامر