تويت
اليوم راح ابدا بالكتبة عن اول نوع من الزراعه وهي زراعة البول ..
شروط جمع عينة البول للزراعه :
1- على المريض الامتناع عن تناول المضادات الحيويه لفترة 4-5 ايام قبل اعطاء العينة لتجنب النتائج السلبية الخاطئه .
2- جمع البول في عبوه معقمه ومحكمة الاغلاق .
تنبيه المريض لعدم فتح العبوه لفترة زمنيه طويله وعدم ملامسة الجوانب الداخلية للعبوه وغلاقها مباشرة بعد وضع العينه .
- يتم جمع البول من المريض بعدة طرق اكثرها شيوعا هي ( تقنية البول الوسطى ) لسهولتها ولانها تقلل تلوث العينه بالبكتريا الموجوده ( وتتلخص بطرح الكمية الاولى من البول خارجا ثم وضع الكمية التالية وسط البول MSU في عبوة الجمع وطرح اخر البول )
زراعة البول :
تستخدم لتحديد النوع البكتيري المسبب للالتهاب ... ويفضل قبل البدء بالزراعه الاخذ بالاتي :
1- اعداد الاوساط اللزمه والمناسبه للبكتريا المتوقع وجودها في العينه .
2- توفير جو معقم للقيام بعملية الزراعه .
3- يجب زراعة البول في جو لاهوائي Anaerobic وذلك لوجود الساكن الطبيعي اللاهوائي Anaerobic Normal Flora في الاحليل والمناطق المحيطه به .
الاوساط الزراعيه :
تزرع عينة البول غالبا على نوعين :
1- وسط الدم Blood Agar وهو وسط غني وملائم لنو معظم انواع البكتريا الموجبه والسالبه .
2- اوساط اختياريه مفرقه مثل EMB و MacConkey Agar وهي اوساط ملائمه لنمو البكتريا السالبه لصبغة غرام ةتعطي دلاله لونيه على البكتريا القادره على تخمر اللاكتوز .
طريقة الزراعة بالتخطيط المباشر :
وهذي تعتبر افضل طريقه ... وتتم كالتالي :
1- اخذ العينه المراد زراعتها ونشرها على الطبق على شكل خطوط مستقيمه 3-4 خطوط بواسطة wire loop .
2- حرق ال wire loop بواسطة اللهب اذا كان العد ليس الهدف , ثم تبريده .
3- فرد او نشر جزء من نهاية الخطوط السابقه بخطوط مقاطعه للخطوط الاولى .
4- حرق ال wire loop مره اخرى وتكرار العمليه .
5- حضن الاطباق على درجة حراره 37 م لمدة 24 ساعه في ظروف هوائيه .
6- مراقبة النمو فان لم يظهر النمو خلال 24 ساعه تترك الاطباق ليوم اخر 48 ساعه وعند بقاء الوضع كماهو في عدم ظهور النمو تسجل النتيجه :
No Growth After 48 Hours
تهف الطريقه الى : الحصول على مستعمرات منفرده , حيث تعتبر طريقه من طرق التخفيف
تلوين البكتريا بصبغة غرام وتشخيصها مجهريا :
تهدف طريقة غرام الى :
1- معرفة تفاعل البكتريا مع صبغة غرام
2- معرفة شكل الخلايا البكتيريه
3- معرفة ترتيب هذه الخلايا مع بعضها
طريقة جرام في الصبغ
1- جهز شريحة زجاجيه نظيفه وضع نقطه من المحلول الملحي Normal Saline على وسط الشريحه
2- بواسطة ال wire loop خذ كمية قليله جدا من النمو البكتيري وامزجها مع المحلول الملحي على سطح الشريحه
3- تجفف ال Smear بالهواء ويمرر فوق اللهب 3 مرات للتثبيت
4- تغمر الشريحه بصبغة جرام Crysal Violet لمدة دقيقه
5- تغسل الشريحه بماء الحنفيه الهادىء , ثم تغمر بمحلول اليود Iodine لمدة دقيقه
6- تغسل الشريحه وتغمر في الكحول مع الاسيتون لمدة 10 - 15 ثانية فقط
7- تغسل الشؤيحه جيدا بالماء الهادىء وتغمر بالصبغه البديله Safranin ولمدة دقيقه
8- تغسل الشريحه جيدا وتجفف جيدا , ثم تفحص
النتيجه :
اذا تقبلت البكتيريا صبغة جرام _______ موجبه لصبغة جرام
( لون بنفسجي )
لم تتقبل صبغة جرام ___________ سالبه لصبغة جرام
( لون احمر )
فيمايلي مخطط توضيحي لتشخيص البكتريا المسببه لالتهاب المسالك البوليه :
( عينة البول )
الزراعه على Blood Agar+ MacC Agar
1- النمو فقط على وسط Blood Agar
عند صبغها بصبغة غرام _________ بكتريا موجبه لصبغة غرام
1- كرويه ( Cocci )
2- عصويه ( Bacilli )
وبفحصها ب Catalase __________
+ ( Staphylococcus )
- ( Streptococcus )
2- النمو على كلا الوسطين :
عند صبغها بصبغة غرام __________ بكتريا سالبه لصبغة غرام
1- كرويه مزدوجه
فحص Oxidase ______ +
Neisseria
Maltose ________ + N.meningitidis
N. gonorrheae - ________
2- بكتريا عصويه
تخمير اللاكتوز ______ +
Enterobacter- E . Coli - Klebsilla - Citrobacter
________ -
Salmonella - Shigella - Proteus - Pseudomonas :sm198:
شروط جمع عينة البول للزراعه :
1- على المريض الامتناع عن تناول المضادات الحيويه لفترة 4-5 ايام قبل اعطاء العينة لتجنب النتائج السلبية الخاطئه .
2- جمع البول في عبوه معقمه ومحكمة الاغلاق .
تنبيه المريض لعدم فتح العبوه لفترة زمنيه طويله وعدم ملامسة الجوانب الداخلية للعبوه وغلاقها مباشرة بعد وضع العينه .
- يتم جمع البول من المريض بعدة طرق اكثرها شيوعا هي ( تقنية البول الوسطى ) لسهولتها ولانها تقلل تلوث العينه بالبكتريا الموجوده ( وتتلخص بطرح الكمية الاولى من البول خارجا ثم وضع الكمية التالية وسط البول MSU في عبوة الجمع وطرح اخر البول )
زراعة البول :
تستخدم لتحديد النوع البكتيري المسبب للالتهاب ... ويفضل قبل البدء بالزراعه الاخذ بالاتي :
1- اعداد الاوساط اللزمه والمناسبه للبكتريا المتوقع وجودها في العينه .
2- توفير جو معقم للقيام بعملية الزراعه .
3- يجب زراعة البول في جو لاهوائي Anaerobic وذلك لوجود الساكن الطبيعي اللاهوائي Anaerobic Normal Flora في الاحليل والمناطق المحيطه به .
الاوساط الزراعيه :
تزرع عينة البول غالبا على نوعين :
1- وسط الدم Blood Agar وهو وسط غني وملائم لنو معظم انواع البكتريا الموجبه والسالبه .
2- اوساط اختياريه مفرقه مثل EMB و MacConkey Agar وهي اوساط ملائمه لنمو البكتريا السالبه لصبغة غرام ةتعطي دلاله لونيه على البكتريا القادره على تخمر اللاكتوز .
طريقة الزراعة بالتخطيط المباشر :
وهذي تعتبر افضل طريقه ... وتتم كالتالي :
1- اخذ العينه المراد زراعتها ونشرها على الطبق على شكل خطوط مستقيمه 3-4 خطوط بواسطة wire loop .
2- حرق ال wire loop بواسطة اللهب اذا كان العد ليس الهدف , ثم تبريده .
3- فرد او نشر جزء من نهاية الخطوط السابقه بخطوط مقاطعه للخطوط الاولى .
4- حرق ال wire loop مره اخرى وتكرار العمليه .
5- حضن الاطباق على درجة حراره 37 م لمدة 24 ساعه في ظروف هوائيه .
6- مراقبة النمو فان لم يظهر النمو خلال 24 ساعه تترك الاطباق ليوم اخر 48 ساعه وعند بقاء الوضع كماهو في عدم ظهور النمو تسجل النتيجه :
No Growth After 48 Hours
تهف الطريقه الى : الحصول على مستعمرات منفرده , حيث تعتبر طريقه من طرق التخفيف
تلوين البكتريا بصبغة غرام وتشخيصها مجهريا :
تهدف طريقة غرام الى :
1- معرفة تفاعل البكتريا مع صبغة غرام
2- معرفة شكل الخلايا البكتيريه
3- معرفة ترتيب هذه الخلايا مع بعضها
طريقة جرام في الصبغ
1- جهز شريحة زجاجيه نظيفه وضع نقطه من المحلول الملحي Normal Saline على وسط الشريحه
2- بواسطة ال wire loop خذ كمية قليله جدا من النمو البكتيري وامزجها مع المحلول الملحي على سطح الشريحه
3- تجفف ال Smear بالهواء ويمرر فوق اللهب 3 مرات للتثبيت
4- تغمر الشريحه بصبغة جرام Crysal Violet لمدة دقيقه
5- تغسل الشريحه بماء الحنفيه الهادىء , ثم تغمر بمحلول اليود Iodine لمدة دقيقه
6- تغسل الشريحه وتغمر في الكحول مع الاسيتون لمدة 10 - 15 ثانية فقط
7- تغسل الشؤيحه جيدا بالماء الهادىء وتغمر بالصبغه البديله Safranin ولمدة دقيقه
8- تغسل الشريحه جيدا وتجفف جيدا , ثم تفحص
النتيجه :
اذا تقبلت البكتيريا صبغة جرام _______ موجبه لصبغة جرام
( لون بنفسجي )
لم تتقبل صبغة جرام ___________ سالبه لصبغة جرام
( لون احمر )
فيمايلي مخطط توضيحي لتشخيص البكتريا المسببه لالتهاب المسالك البوليه :
( عينة البول )
الزراعه على Blood Agar+ MacC Agar
1- النمو فقط على وسط Blood Agar
عند صبغها بصبغة غرام _________ بكتريا موجبه لصبغة غرام
1- كرويه ( Cocci )
2- عصويه ( Bacilli )
وبفحصها ب Catalase __________
+ ( Staphylococcus )
- ( Streptococcus )
2- النمو على كلا الوسطين :
عند صبغها بصبغة غرام __________ بكتريا سالبه لصبغة غرام
1- كرويه مزدوجه
فحص Oxidase ______ +
Neisseria
Maltose ________ + N.meningitidis
N. gonorrheae - ________
2- بكتريا عصويه
تخمير اللاكتوز ______ +
Enterobacter- E . Coli - Klebsilla - Citrobacter
________ -
Salmonella - Shigella - Proteus - Pseudomonas :sm198: