طريقة تعين نسبة الكرياتينين فى الدم ( Jaffe Reaction)
-----------------------------------------
تعتمد هذه الطريقة اللونية( Jaffe Reaction) على تفاعل الكرياتينين (الموجود فى السيرم أو البول) مع حمض البكريك القلوى(Alkalin Picric Acid ) فيعطى لون برتقالى محمر.
العينات المستخدمة Sampls )
--------------------------------
يمكن قياس الكرياتينين فى البلازما أو السيرم أوالبول (بشرط تجميع بول 24 ساعة للشخص المراد قياس الكرياتينين له)
أولا تقدير نسبة الكرياتينين فى الدم : Serum Creatinine
---------------------------------------
نأخذ من الشخص عينة دم وريدى توضع فى أنبوبة سنتر فييوج وتترك حتى تتجلط ثم تدار فى جهاز السنتر فيوج لفصل السيرم أو نستخدم مانع تجلط للحصول على البلازما (فى هذا الأختبار لا يشترط مانع تجلط معين)
فصل البروتين :- Deprotenization
----------------
تأتى خطوة فصل البروتين عن السيرم أو البلازما بواسطة مرسب البروتين(حامض ثلاثى كلوريد الخليك .T. C. A ) وهى كالآتى :
نأخذ فى أنبوبة سنتر فيوج 1 مللتر من السيرم أو البلازما يضاف اليها 1 مللتر من مرسب البروتين (.T. C. A ) ثم نرج جيدا نلاحظ تعكرمحتوى الأنبوبة بعد عملية الخلط تدار الأمبوبة فى جهاز السنتر فيوج ( الطرد المركزى) لفصل البروتين ونحصل من هذه العملية على المحلول الرئق Supernatant الذى يتم تقدير الكرياتينين فيه.
المحاليل المستخدمة :- Reagents
----------------------------------
1- المحلول القياسى تركيز : Creatinine standard 2.0mg/dl
---------------------------------------------------------------------
T S B
-----------------------------------------
1ml -- -- المحلول الرائق Supernatant
---------------------------------------------------------------------------
-- 0.5ml -- المحلول القياسى Standard.:sm187::sm187::sm187:
---------------------------------------------------------------------------
-- -- 0.5ml ماء مقطر Dist.Water.
------------------------------------------------------------------------------
-- 0.5ml 0.5ml .T. C .A.
----------------------------------------------------------------------------
1ml 1ml 1ml البكريك القلوى working solution
-----------------------------------------------------------------------------
Mix, let stand for exactly20 minutes at 20- 25 ċ.
--------------------------------------------------------------------------------
2- حمض البكريك : (color reagent)
----------------------
3 - هيدروكسيد الصوديوم : (Alkaline reagent)
---------------------------------
يتم خلط المحلول 2 و 3 للحصول محلول البكريك القلوى (working solution) الذى يستخدم فى الإختبارمباشرتا.
طريقة عمل الاختبار :-
---------------------
نقوم بتحضير ثلاثة أنابيب نظيفة جافة ونميزها بالرموز/ B / S / T /
- الأنبوبة B وهى الخاصة بمحلول البلانك - الأنبوبة S وهى الخاصة بالمحلول القياسى - الأنبوبة T وهى الخاصة بعينة الأختبار
ثم نقوم بتنفيذ الجدول الموضح فى الأنابيب بأن نضع 1مللتر من المحلول الرئق فى أمبوبة العينة (T) نضع 5ر0 مللتر من المحلول القياسى فى أمبوبة (S) نضع 5ر0 مللتر من الماء المقطر فى أمبوبة (B) نضع 5ر0 مللتر من ( .T.C.A) فى كل من أمبوبة(ٍ S و B ) & نضع 1 مللتر من محلول البكريك القلوى فى الثلاث أنابيب 0 (يجب أن يكون مجموع حجم المحاليل فى الثلاث أنابيب يكون متساوى)
نترك الأنابيب مدة 20 دقيقة قبل عملية القراءة ثم يضبط جهاز قياس الألوان عند طول موجة ( 546 nm ) ثم يضبط صفر الجهاز على محلول البلانك (B) ثم نأخذ قراءة أمبوبة المحلول القياسى (S) و قراءة أمبوبة العينة (T) تسجل القراءة 0
الحساب :- Calculation
-----------------------------
نسبة الكرياتينين فى البلازما =
قراءة العينة × 2
----------------------------------
قراءة المحلول القياسى:sm187::sm187::sm187: