بسم الله الرحمن الرحيم
أولا قبل لا نبدأ الموضوع حاب اقولكم خلفية علمية مكتشف هذه الطريقة عالم بيرطاني يدعى سانجر
![](http://www.rsc.org/images/FEATURE-sanger1-250_tcm18-42175.jpg)
وتسمي chain termination method طريقة قطع السلسلة ، و مبدأها العلمي بسيط جدا و لكي نفهم المبدا ركزوا في التالي :
اللبنات الأساسية لبناء المتسلسلة الوراثية Sequence عبارة عن
A
C
G
T
و لنأخذ نظرة عن التركيب الجزيئي لهذه القواعد
![](http://www.cbs.dtu.dk/staff/dave/roanoke/fig5_38.jpg)
في الحالة الطبيعية DnTPS تدعم عملية التوصيل elongation
و لكن في الحالة الثانية بعد نزع ذرة الأوكسجين في DDnTPS فأنها لا تدعم التوصيل ببعض و يحصل ايقاف لتركيبة السلسلة . طيب حط في الحسبان
فلو استخدمنا تفاعل PCR بالظروف التالية
A C T عبارة عن DnTPS و لكن اضفنا معها G على أنها DDnTP لا تدعم الارتباط أي لن يرتبط بعدها اي قاعدة و ستوقف التفاعل على التمبلت او خيط DNA الموجود
التجربة :
المواد :
منتج PCR قد سبط عزله بطول معين 100 او 300 او 1000 قاعدة متسلسلة bp
TaqPol انزيم البلمرة
بفرز او محاليل منظمة للتفاعل
قواعد سليمة من ACT
قاعدة منقوصة من G
برايمر أو بادئة خاصة بالمنتج
نعمل الماستر مكس و نحطها في جهاز الدوران الحراري Thermal Cycler
سيظهر لدينا منتج بأطوال متباينة يتوقف عند كل قاعد G
كما في الصورة
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/example%20sequence.gif)
سؤال لو عملنا فصل كهربي على الجل أيها سيعبر اسرع ؟
الأقل وزنا أي الأقرب في السلسلة
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/PAGE%20of%20G%20reaction.gif)
اذن لو قمنا بأربع تفاعلات في كل تفاعل نغير قاعدة ، سنتج لنا منتجات PCR مفصوله بأصول معينة و منها نملأ الفراغ
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/autoradiogram.gif)
هذا للطريقة التقليدية
و اما بالنسبة للطريقة الآليه مثل جهاز ABI prism
فيتم دمج الأصباغ مع بعضها و كل مكان يتوقف فورا عند ارتباط قاعدة DDnTPS و لأن المخلوط أساسا
مكون من DnTPS و أيضا DDnTPS فأيها يرتبط يستمر و يتوقف التفاعل
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/dye%20label%20for%20automated%20sequencing.gif)
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/PAGE%20for%20automated%20sequencing.gif)
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/chromatogram.gif)
و أي سؤال أنا حاظر
أولا قبل لا نبدأ الموضوع حاب اقولكم خلفية علمية مكتشف هذه الطريقة عالم بيرطاني يدعى سانجر
![](http://www.rsc.org/images/FEATURE-sanger1-250_tcm18-42175.jpg)
وتسمي chain termination method طريقة قطع السلسلة ، و مبدأها العلمي بسيط جدا و لكي نفهم المبدا ركزوا في التالي :
اللبنات الأساسية لبناء المتسلسلة الوراثية Sequence عبارة عن
A
C
G
T
و لنأخذ نظرة عن التركيب الجزيئي لهذه القواعد
![](http://www.cbs.dtu.dk/staff/dave/roanoke/fig5_38.jpg)
في الحالة الطبيعية DnTPS تدعم عملية التوصيل elongation
و لكن في الحالة الثانية بعد نزع ذرة الأوكسجين في DDnTPS فأنها لا تدعم التوصيل ببعض و يحصل ايقاف لتركيبة السلسلة . طيب حط في الحسبان
فلو استخدمنا تفاعل PCR بالظروف التالية
A C T عبارة عن DnTPS و لكن اضفنا معها G على أنها DDnTP لا تدعم الارتباط أي لن يرتبط بعدها اي قاعدة و ستوقف التفاعل على التمبلت او خيط DNA الموجود
التجربة :
المواد :
منتج PCR قد سبط عزله بطول معين 100 او 300 او 1000 قاعدة متسلسلة bp
TaqPol انزيم البلمرة
بفرز او محاليل منظمة للتفاعل
قواعد سليمة من ACT
قاعدة منقوصة من G
برايمر أو بادئة خاصة بالمنتج
نعمل الماستر مكس و نحطها في جهاز الدوران الحراري Thermal Cycler
سيظهر لدينا منتج بأطوال متباينة يتوقف عند كل قاعد G
كما في الصورة
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/example%20sequence.gif)
سؤال لو عملنا فصل كهربي على الجل أيها سيعبر اسرع ؟
الأقل وزنا أي الأقرب في السلسلة
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/PAGE%20of%20G%20reaction.gif)
اذن لو قمنا بأربع تفاعلات في كل تفاعل نغير قاعدة ، سنتج لنا منتجات PCR مفصوله بأصول معينة و منها نملأ الفراغ
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/autoradiogram.gif)
هذا للطريقة التقليدية
و اما بالنسبة للطريقة الآليه مثل جهاز ABI prism
فيتم دمج الأصباغ مع بعضها و كل مكان يتوقف فورا عند ارتباط قاعدة DDnTPS و لأن المخلوط أساسا
مكون من DnTPS و أيضا DDnTPS فأيها يرتبط يستمر و يتوقف التفاعل
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/dye%20label%20for%20automated%20sequencing.gif)
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/PAGE%20for%20automated%20sequencing.gif)
![](http://www.bio.davidson.edu/Courses/Molbio/MolStudents/spring2003/Obenrader/chromatogram.gif)
و أي سؤال أنا حاظر
تعليق